反向转化成正相后的出现的问题

药物分析 » 讨论区 » 分析百问 » 反向转化成正相后的出现的问题

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[未解决]反向转化成正相后的出现的问题

[未解决]本主题悬赏可用分 10

ziyanko[使用道具]
二级
Rank: 2

UID 61683
精华 0
积分 118
帖子 4
信誉分 102
可用分 674
专家分 2
阅读权限 255
注册 2011-4-19
状态离线

发表于 2011-4-28 14:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在下于前段时间就“反相转化为正相”请教了各位前辈高人，并在大家的指点下把系统转化成了正相，现在用此系统做正相出现了问题：1、进样品，保留时间为22分钟左右，峰型还算正常，面积在1700左右。2、进标准品，在22分钟左右出来个小得几乎看部见的峰。

以下是本人的具体操作：大家看看是否有不当之处。原反相系统流动相为甲醇：水=95：5，用的C18的柱子，检测波长为265，本人先用纯甲醇以1.0的速度冲系统和C18柱子1小时，再把C18柱子取下，接上双通，用异丙醇冲系统1小时，然后接上硅胶柱（2年未用过了）用正己烷冲柱子和系统1小时，以正己烷：正戊醇=997：3为流动项冲柱子1小时，然后进样（样品和标准品的配制见中国药典2010版维生素D的检测)

求高手指点，问题出在哪里？

本帖最近评分记录

miracle 2011-4-28 15:34 可用分 +2 鼓励新手发起话题交流！欢迎常来！ ...

dragon5[使用道具]
一星
Rank: 6

UID 434
精华 15
积分 4103
帖子 1582
信誉分 160
可用分 5292
专家分 786
阅读权限 255
注册 2007-10-16
状态离线

发表于 2011-4-28 17:01 资料个人空间短消息加为好友

小中大

没有换成正相做过，太麻烦了。你可以找本叫液相色谱概论的书看看，那上面应该有详细的反相改正相的办法。好像你的方法太简单了。

fence-straddler[使用道具]
五级
Rank: 5

UID 26191
精华 0
积分 1875
帖子 620
信誉分 101
可用分 2346
专家分 407
阅读权限 255
注册 2009-8-21
状态离线

发表于 2011-4-28 17:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #1 ziyanko 的帖子

系统的溶剂更换没问题，既然柱子长时间未用，就需要较长时间的平衡时间。

如果标品浓度跟样品差不多，结果说明22分钟出的那个峰可能只是杂质峰。建立方法之初应该首先保证样品能被冲出来，所以先用大比例的极性溶剂（比如异丙醇）尝试，或者梯度洗脱。

而且还有一个问题，你反相柱用的流动相用的是甲醇：水=95：5，说明该化合物极性很小，适合反相，为什么要换成正相呢？

naren4545[使用道具]
VIP群主

UID 5131
精华 6
积分 4314
帖子 1852
信誉分 118
可用分 5983
专家分 440
阅读权限 255
注册 2008-7-2
状态离线

发表于 2011-4-28 18:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你的色谱操作没有错@

aasle[使用道具]
一星
Rank: 6

UID 14616
精华 10
积分 3737
帖子 1859
信誉分 135
可用分 5618
专家分 521
阅读权限 255
注册 2009-3-29
状态离线

发表于 2011-4-29 09:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

维生素D？反相C18柱（20cm），普通HPLC，甲醇：异丙醇=95:5，7分钟左右出峰

药物分析

药物分析 » 讨论区 » 分析百问 » 反向转化成正相后的出现的问题

标题:[未解决] function setanswer(pid){ if(confirm("您确认要把该回复选为“最佳答案”吗？")){ document.delpost.action='misc.php?action=bestanswer&tid=44543&pid=' + pid + '&bestanswersubmit=yes'; document.delpost.submit(); } } 反向转化成正相后的出现的问题

反向转化成正相后的出现的问题

回复 #1 ziyanko 的帖子

标题:[未解决]反向转化成正相后的出现的问题