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标题:【求助】 一抗体类蛋白在纯化过程中纯度偏低,该从...

jkobn[使用道具]
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【求助】 一抗体类蛋白在纯化过程中纯度偏低,该从...


一抗体类蛋白多批次在纯化过程中:疏水层析高分子含量偏高,接着离子层析主峰SEC-HPLC纯度偏低.
请问大家,这该从哪些方面进行调查? 谢谢!
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newway[使用道具]
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你这顺序颠倒啊,先离子在疏水是个正常逻辑
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newway[使用道具]
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你应该找下亲和层析的胶
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dog002[使用道具]
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或者 分子筛+疏水
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dog002[使用道具]
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主要是离子层析分辨率不高,但浓缩作用明显,作为第一步层析还可以,第二步效果不明显
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ending[使用道具]
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估计这个可以在疏水层析收峰前加一步洗杂
或者把离子交换收峰的盐浓度降低些
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gogo[使用道具]
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谢谢大家,是想找原因改进,但不能改工艺
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ending[使用道具]
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简单说下你的工艺流程,你不会想2步就纯化完成吧?

另外,你的目的是什么,是想制备点蛋白做研究,还是开发下游纯化工艺?这是2个概念,工艺设计也不一样。

疏水层析高分子含量偏高 是什么意思?聚集体含量高?如果你是做工艺开发,建议第一步还是protein A亲和层析,现在第一步不是亲和的申报都会被质疑。

离子交换需要进行工艺优化:load pH,load cond,load capacity,wash pH,cond,elution pH,cond,如果离子交换SEC纯度,建议进行优化,或者DOE筛大范围,再优化。

我用50um的离子分mAb的charge variant,能够去掉27%的 basic component及5%的acidic component,收率还能在55%左右。优化很重要。
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