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标题:[未解决]跑标品的时候，竟然没有峰出来会是什么原因呀？

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哦买噶[使用道具]
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发表于 2015-4-13 22:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

跑标品的时候，竟然没有峰出来会是什么原因呀？

跑标品的时候，竟然没有峰出来会是什么原因呀，隐黄素（一种脂溶性、弱极性的色素），C18柱，PDA检测器，用的流动相：乙腈：水=9：1，会不会是流动相的问题？还是其他的问题呢？
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集贤阁[使用道具]
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发表于 2015-4-13 22:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
丙酮是第一步溶解的时候用了，后来用了乙腈稀释的，不会影响很大。波长你用245吧，400多都超了UV范围了。基线不平稳的因素有很多，可能与仪器是否平衡好也有关。
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哈达[使用道具]
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发表于 2015-4-13 22:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1、反相色谱，极性越小越难洗脱。
2、但就极性而言，水>乙腈。90%乙腈极性小于50%极性，90%乙腈的洗脱力大于50%。
3、反相色谱中不建议加入EA。
4、可以考虑，在流动相中加入一定比例的四氢呋喃或者异丙醇，增加洗脱力。
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发表于 2015-4-13 22:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
丙酮在400附近已经没有吸收了，不会影响出峰。
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发表于 2015-4-13 22:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你需要检查一下DAD光源的设置。通常测200～300nm吸收时用于长波的钨丝灯是不开的，而你测420左右吸收时钨丝灯是必需的。
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誓言@谎言[使用道具]
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发表于 2015-4-13 22:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
90%乙腈？pda可以看全波长范围内的吸收，你挪动波长看看有没有峰。也可以用紫外看看有没有吸收和最大吸收波长。
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发表于 2015-4-13 22:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用紫外分光光度计200-800nm扫描，有两个吸收峰 其中一个在453nm吸光度1.6几和目标物差不多，还有一个245 而且吸光度9.999，且基线不是很平稳。PS：标品用丙酮溶解，吸取200μl用乙腈定溶至10ml，20μl的上样量。不知分光光度计基线不平是否与溶解用的丙酮有关，开始以为HPLC上样量少就没管了，会影响HPLC么  谢谢
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mr.henry[使用道具]
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发表于 2015-4-13 22:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
隐黄素的极性很小啊！
还有一种可能，在柱子上保留太强，90%的乙腈洗脱力不够。
楼主有条件的话，可以考虑用C8柱试试。
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娜爷~[使用道具]
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发表于 2015-4-13 22:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可我的目标物的最适波长是450nm，不清楚波长扫描还出了另外一个大峰是怎么回事
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小书虫[使用道具]
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发表于 2015-4-13 22:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是呀，隐黄素极性很小，应该是很容易洗脱出来的，目前只能用18柱的。在反相柱里面90%乙腈应该是极性应该较大了，反相柱中90%乙腈极性大于50%极性，不知这样理解是否正确？另外，看到有流动相A乙腈：水 9：1,B乙酸乙酯，这样是不是又增大了流动相的极性？  谢谢
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