小中大反相色谱柱的日常维护
（注意：反冲柱子的操作仅限于welch公司的色谱柱，其它公司的柱子不建议使用）
色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关外，最主要的是与日常的维护密切相关。色谱柱的使用寿命主要是根据柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱柱效太低或柱压太高，通常被认为该色谱柱的使用寿命已经结束。因此，延长色谱柱使用寿命的关键是，消除引起柱效下降和柱压升高的因素。以下是色谱柱的日常维护方法：
一. 流动相的pH应在使用范围内
Welch公司的色谱柱除反相氰基柱pH1.5~9.0外，其它反相色谱柱的pH范围均为1.5～10，由于填料中存在Si-C和Si-O键，流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，使用寿命变短。由于流动相的pH控制不当而对色谱柱造成的损害，通常很难使色谱柱恢复，因此必须认真对待，严格控制流动相的pH值。
二. 去除样品和流动相中的固体颗粒
样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，筛板被堵不仅会引起柱压的升高，而且也会引起柱效下降，因为筛板的堵塞会引起液流不均，导致色谱峰形拖尾、变宽，从而使柱效下降。因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析前对样品进行针筒过滤，流动相过0.45um滤膜。
三. 使用保护柱或在线过滤器
样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质，因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质，这些固体颗粒被流动相带入色谱柱，堵塞筛板，导致柱压升高、柱效下降。保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱筛板孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例，因此，除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
如果确认色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的，可选择以下方式进行补救：
1. 先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器，然后用甲醇/水＝20/80 1.0ml/min
反向冲洗色谱柱180min。
2. 先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器，然后反向使用。
四. 正确使用缓冲盐
缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂，因此缓冲盐使用不当会使其析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展，使色谱柱的保留能力下降，柱效降低。缓冲盐析出后，去除非常困难，因此，正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要。
正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出，因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过渡，使用后要冲洗。具体方法如下：
1. 等度条件：使用缓冲盐前需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗30min，
使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗
色谱柱过夜。
2. 梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗30min；分析完成后，再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱45min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。
注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同，区别只是过渡流动相中不含缓冲盐。
3. 缓冲盐析出的补救方法：
1）方案1：用甲醇/水＝20/80以1.0ml/min流速35℃条件下反向冲洗色谱柱120min；
2）方案2：用甲醇/水＝20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜。
五. 防止强保留物质在色谱柱中存留
强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积，对样品中的化合物产生额外的保留行为，不仅引起峰形变宽、拖尾，使柱效下降，同时也会引起保留时间的变化，累积到一定程度时还会导致柱压升高。由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应，需要一定的时间才会体现出来，但对许多样品特别是复杂样品而言，很难判断其是否含有强保留物质，因此要防止强保留物质的累积，需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙腈清洗色谱柱。
清洗方法：
1. 未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2. 使用过缓冲盐：分析完成后，先用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。
3. 补救方法：
水 —— 乙腈 —— 氯仿（或异丙醇）—— 乙腈 —— 水
每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min。
