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标题:【求助】液相峰分不开

ztonyc[使用道具]
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1
 

【求助】液相峰分不开

最近液相跑一个甲醇提的样品,想要的那两个峰始终分不开(如图一图二红色箭头所示)。
图一是再甲醇:水=15:85恒定条件下洗脱的结果。
图二是用甲醇和水梯度洗脱的结果,其梯度条件如下:
0-2分钟 100%水,2-30分钟水的浓度逐渐变成85%,30-35分钟水的浓度逐渐变成0,35-38分钟水的浓度变为50%,38-40分钟水的浓度变为85%。
另外,箭头所示那两个峰在水中溶解度很低(图示是在甲醇中溶解样品跑的结果)。
我实在不知道怎么把这两个峰分开了,恳请各位高手支支招,帮在下出出主意吧。谢谢啦
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ns5fan[使用道具]
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2
 
用乙腈代替甲醇试试,因为乙腈的分离效果比甲醇好
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ffaa[使用道具]
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方法1  换流动相系统
      2  换色谱柱
      3  如果你什么都没有,还用这个方法的话,多用水相洗脱,那是没有办法了。你的色谱图1 可以看出,15%甲醇水溶液对目标物洗脱能力还是挺强的,而且两种物质还是可以分开的。那可以再试试10% 和5% 甲醇溶液的效果,然后确定低浓度甲醇的使用比例和时间,优化条件。
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yizhi[使用道具]
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有机相比例下调,另外感觉你这个样品不太好分,估计得用梯度洗脱,流动相还得改变
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langlang[使用道具]
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5
 

从图1的结果看,应该再加异丙醇等调节选择性。
图2的梯度设计属于不动脑,因此也就没什么参考价值了
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caihong[使用道具]
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6
 
目标物质大概是什么呢?如果大体知道,可以判断用甲醇或者乙腈体系。
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langlang[使用道具]
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7
 
不知道你分析的物质是什么,没法给你做出分析。

最起码要知道物质的结构,好根据其结构特性去调整分析方法,要想分离不是简单的光调调流动相组份的比例就能搞定的。
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ztonyc[使用道具]
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8
 

目标物质具体是什么不知道,所以我们才想分出来去打质谱做NMR以确定其分子结构。但根据我们做的基因的功能推测,应该是腺苷酸(三磷酸或者二磷酸一磷酸都有可能)加了一些其它未知的修饰基团或者是空间构象有一些特别的变化,即很有可能是腺苷酸的一些新的衍生物。
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