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标题:【讨论帖】制备色谱技术与操作

babybabe[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
流动相中含有盐时，收集液该如何除盐？选用挥发性酸，碱或盐（如醋酸铵）是否会在挥干溶剂或冻干过程中直接除去？
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ns5fan[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 babybabe 于 2015-4-21 15:46 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
流动相中含有盐时，收集液该如何除盐？选用挥发性酸，碱或盐（如醋酸铵）是否会在挥干溶剂或冻干过程中直接除去？

一般可以采用离子吸附的办法去掉（可以参考离子吸附有关技术）。但也是稍微麻烦的事情，最好，不加加酸碱盐，如果要加的话最好，要加挥发性的或者对产品或者检测没有干扰的。
可用G25脱盐，它是安马西亚出的一种葡聚糖凝胶。交联度大孔径小,对小分子的无机盐保留较大,而对分子量较大的有机物没有保留从而可以将盐份脱除。另外采用挥发性的酸，碱时，一般会在干燥过程中直接除去，但如果样品也有酸碱性，可能会与这些挥发性酸碱形成一定比例的盐。
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发表于 2015-4-21 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
制备型柱子柱压上升 柱效下降 怎么办？
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发表于 2015-4-21 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 zzzz 于 2015-4-21 15:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备型柱子柱压上升 柱效下降 怎么办？

对高价值的制备柱来讲，延长柱子寿命是很重要的。一般要注意保护柱子，一般来说，制备柱子一般需要保护柱配套。
下面是可能堵塞柱子的原因：
（1） 如果您所分离的样品中杂质较多而您在上样前没有经过过滤（0.45微米），一些颗粒性杂质会积聚在柱头造成柱压升高，
（2） 也有可能是因为您所使用的流动向中含有缓冲盐的原因，结晶或发生化学变化而堵塞。可以把柱子冲一冲。
（3） 流动相是否符合液相色谱的要求？是否过滤处理？
。柱子再生处理办法如下：
（1）依次用水，甲醇，四氢呋喃，氯仿，甲醇来冲洗柱子，每种溶剂5-10个柱体积。
（2）如果效果不明显，将柱子按以上顺序反冲，一般将大大降低柱子效果，不到不要没有办法才采用。
（3）如果效果还是不好，就需要打开色谱柱，超声波清洗筛片（这样也会使柱子效果下降）。必要时挖掉色谱柱内受污染部位，填入新的填料，还可用3个月。（填的时候小心，别重新污染柱子）
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
制备柱柱跑干了影响柱效吗?
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发表于 2015-4-21 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 zhezhe 于 2015-4-21 15:47 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备柱柱跑干了影响柱效吗?

如果时间不长的话,可以用流动相多冲几个小时.柱效不一定变化很大.如果时间太久,柱效一定变低. 具体造成影响有多大，要靠柱效测定来确定，而不是干柱时间的长短。如果跑干了，对于PUMP的影响可能还大些，所以最好先把管路中的空气抽走再说。
一般说来，制备柱子跑干，属于操作失当。柱子闲置不用时，最好冲入甲醇或其他有机溶剂，一定要把两头堵住密封，这样保留的时间会较长。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
分析HPLC如何放大到制备型HPLC
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发表于 2015-4-21 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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原帖由 shenkunjie 于 2015-4-21 15:48 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
分析HPLC如何放大到制备型HPLC

在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:10000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。
分析系统线形放大到制备型HPLC意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，但这种方法从经济上一般不合适。
在制备液相中，最大的区别就是超量进样。制备的分离峰形一般不可能仍会保持尖锐而对称，分析和制备是不同的概念。制备的首要概念是在达到纯化的基础上，降低成本，加快时间（提高效率）。一般说来，纯化的成本要高于生产粗产品的成本，所以，可以加大上样量，甚至过载，出现平头峰，而收集只集中在峰的一小部分，以来保证纯度，主要为了节省流动相和提高设备利用率。
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mamamiya[使用道具]
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 小中大
制备纯化蛋白、多肽，耗用流动相惊人，请问这些用过的流动相（乙腈，甲醇）可以重蒸使用吗？
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 小中大


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原帖由 mamamiya 于 2015-4-21 15:49 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备纯化蛋白、多肽，耗用流动相惊人，请问这些用过的流动相（乙腈，甲醇）可以重蒸使用吗？

流动相用一般减压方法重蒸后，往往会形成有机溶剂和水会共沸，另外，由于减压蒸馏属于单次平衡，往往得不到100%纯度的溶剂，这会使溶剂的配置有一定困难，从而使色谱的重现性和分离度会发生一定的变化。如果要求不是很高的话，一般可以分析重蒸后馏分中的各组分含量，计算后再使用。
要通过重蒸得到纯物质是极其困难的，必须采用精馏塔多级蒸发，单就设备投资和能耗来讲，实验室规模或生产规模的废液回收处理已经是得不偿失。其实，我们没有必要得到纯的物质。
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