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标题:【讨论帖】制备色谱技术与操作

finger[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质？
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ns5fan[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 finger 于 2015-4-21 15:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
反相色谱分离纯化后，怎样除去流动相产品中的TFA和乙腈或其他杂质？

TFA是反相色谱分离中常用的添加剂。可以用冻干的办法去除，国外许多文献是这样报道的。还可以试试离子交换、凝胶层析、甚至透析和超滤，其中，离子交换层析效果比较好，还可以起到浓缩样品的作用。
首先，冻干的办法应该可以几乎彻底地除去TFA和乙腈，药物实验前最好先检测一下冻干品中的残留量，只要不超过允许范围，这种办法是最最简单、有效的。
其次，如果你的药物的分装量不大的话(<100ug)，建议你用离子交换层析，最好装一个小一点儿的柱子，让含盐洗脱峰的蛋白浓度达10mg/ml以上，稀释后完全符合试验要求。如果用分子筛，考虑稀释，最好也先过一个离子交换。此外可以试试疏水层析。如果产品是碱的话，可能会形成TFA盐，这样通过上述方法就无法除去。一般可以用碱水洗，然后将产品萃取出来。或者在里面加入一定量的盐酸，再干燥后形成盐酸盐。
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发表于 2015-4-21 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？
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发表于 2015-4-21 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 toy 于 2015-4-21 15:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
同一种填料的分析柱、制备柱按线形放大公式套，分离度会不会变化？

一般会有一定的变化，原因有以下几点
（1） 制备柱的装填是否均匀，如不均匀则可能产生涡流扩散使各个组分的经过通道的直径不同、阻力不一样，停留时间不同，色谱峰可能变宽。
（2） 如果样品在流动相中溶解度小，在制备色谱上会有不同的峰展宽。
（3）如果样品在分析柱上有展宽或拖尾的现象，放大到制备柱上后峰的展宽和拖尾经常会非常严重，导致分离失败。
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@木木@[使用道具]
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 小中大
制备色谱柱如何测柱效？
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ns5fan[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 @木木@ 于 2015-4-21 15:51 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
制备色谱柱如何测柱效？

可以选择几种物质，苯，甲苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流动相一般用65-80%的甲醇/水，测定后根据保留时间计算塔板数。由于制备色谱的管路死体积一般比较大，很难得到和供应商相同的柱效。建议在制备柱开始使用时在自己的色谱上测一下柱效，然后定期检测柱效进行以进行比较。
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发表于 2015-4-21 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
反相色谱分离后，如何快速从流动相中得到产品？
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ns5fan[使用道具]
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发表于 2015-4-21 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 one 于 2015-4-21 15:52 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
反相色谱分离后，如何快速从流动相中得到产品？

可以考虑先在低温下，减压旋蒸除去其中的有机溶剂，然后用萃取的方法（如yi醚、氯仿萃取等）把产品萃取出来，然后再低温再旋蒸，这样，就可以不将温度升得很高而得到产品。
如果要直接蒸掉流动相，水泵的真空度要注意（要检查气密性），否则蒸水会很慢。一般比较好的泵在60-70度即可蒸掉水，如果泵的真空度不好，可能需要80-90度才行，这样容易暴沸导致样品损失。另为，温度太高可能引起物质变性。
参考书目：略/ ：
需要 《制备色谱在天然产物中的应用》的 朋友，可以从下面的email下载。。。
wangcailiu2@163.com 密码：1234567
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发表于 2015-4-21 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
真的是说得太简单了一点。你说的好多参数和我的都不一样，我的那些参数比你所说的大多了，比如流速图片点击可在新窗口打开查看
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发表于 2015-4-21 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问卷烟厂的制备液相怎样配置较好？我选用美国VARIAN的制备液相
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