【求助】氨基柱的流失

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标题:【求助】氨基柱的流失

PINK[使用道具]
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发表于 2015-4-21 16:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

新买的Luna氨基柱, 流动相用含水很多(大概90%), 发现峰的保留时间不断提前; 而且用Mass时背景干扰很高, 不进样品只用流动相时, 质谱scan100-1000,结果出现227和453两个比较高的离子, 请问是不是由于柱子中的键合相被冲出来造成的??

abc816[使用道具]
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发表于 2015-4-21 16:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

按说明书,
氨基柱可以用水的.
本人有同样的问题:
用氨基柱,流动相用含水较多,ELSD的基线噪音很大,而同时打开VWD,噪音很小.

veiwu[使用道具]
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发表于 2015-4-21 16:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

据说:氨基柱水相超过30％，会造成键合相流失，

所以......

gogo[使用道具]
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发表于 2015-4-21 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

氨丙基直接与硅胶结合，氨基的强碱性会使基质硅胶溶出，在含水率高的流动相中，色谱柱寿命比较短。

xue258[使用道具]
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发表于 2015-4-21 16:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

转贴:
氨基柱的使用和保养

         氨基柱是同时可以用于正相条件和反相条件的这一点很多用户都已经知道；但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。

         对于新购买到的柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压很高，适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
                     柱效检测：

         我用于判断一个用户是否有经验的指标之一，是用户是否习惯配制一些柱效检测标准溶液。说到柱效检测，我可以向大家提供一个方法，而且很通用，你也可以用同样的标准溶液和流动相来检测硅胶柱和氰基柱。
                     流动相：
                     10％乙酸乙酯＋90％正己烷流速1.0
                     标准溶液：
                     乙苯（如乙苯找不动就用甲苯代替呗）＋苯甲酸甲酯
                     检测波长254nm

         这个方法特别适用于新购柱子（新购柱子往往保存在正相溶剂中）时即进行检测，如有问题，可及时与供应商沟通。也适合在柱子在准备放置相当长一段时间之前进行充分清洗后进行检测作为记录留档。在平常的使用过程中，如果分析物是固定重复的，我们当然可以从对分析物的分离分析情况来作出判断；但如果分析物和分析条件不同时，定期检测柱效可以避免柱效下降导致分离不佳再分析查找原因这样浪费人力物力的过程。不过特别要注意的是，当氨基柱（或氰基柱）在反相条件中使用时，如用该条件检测，请注意流动相的换相过渡问题。

                  氨基柱的使用方法
                     1.

         氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的，正常情况新氨基柱保存在正相环境中，例如LUNA

                     氨基柱保存在正己烷-乙腈（99：1）中。
                     2. 正相使用
                     2.1

         新柱子可直接用流动相。推荐先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再根据流动相选用极性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速冲10倍柱体积，最后换成流动相。
                     2.1

         正相使用时，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量不好的yi醚、四氢呋喃含有少量）。
                     2.3 任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶。

xue258[使用道具]
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发表于 2015-4-21 16:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

3 反相使用
                     3.1 先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。
                     3.2 以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（  0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。
                     3.3 配制流动相时，应各组分分别量取，比例较小的组分要精密量取，需调pH值时要精密到0.1。
                     3.4  反相条件下使用时，要特别注意控制pH值范围，pH值越低越有发生水解的危险，流动相中水的比例越高当然也越有发生水解的危险。最理想的pH范围在pH 3.0-7.0
                     3.5 如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类，建议在用分析流动相之前，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
                     3.6 有一种情况是，当使用氨基柱进行酸性物质的分析时，酸性物质的存在意味着质子的存在，可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨），之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％。
                     4 色谱柱的冲洗：简单说起来，正相条件下使用的氨基柱就参照硅胶柱的清洗方法；反相条件下使用的氨基柱就参照C18的清洗方法。
                     5 色谱柱的保存
                     5.1 正相使用时，将柱子冲洗干净后，用正己烷-乙腈（99：1）保存。
                     5.2
         反相使用时，如短期不用，可用甲醇或乙腈保存；长期不用时需将甲醇依次用异丙醇、氯仿置换，最后用正己烷保存。

xue258[使用道具]
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6 色谱柱的再生
                     6.1 方案1：依次用甲醇、异丙醇、氯仿、正己烷、氯仿、异丙醇、甲醇冲柱子（各以
         0.5ml/min的流速，20倍柱体积），再换流动相。这些清洗方法，主要是针对当样品中有杂质逐步吸附累积到填料上时的处理方法，色谱柱表现行为为诸如柱压增高柱效降低等。
                     6.2
         方案2：NH2柱用于反相条件时，NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱寿命会下降很快，如果在这个条件下使用需要清洗一下，需要用10倍柱体积溶液冲洗，如下：
                     95％水/5％乙腈
                     THF四氢呋喃
                     95％乙腈/5％水
                     并保持95％乙腈/5％水继续冲洗，以低流速0.2-0.5mL/min过夜冲洗。
                     6.3
   方案3：柱子使用一定时间后，柱效下降，老化，也可清洗一下柱子恢复柱性能,清洗时依次用10倍柱体积的下列溶液冲洗：
                     95％水/5％乙腈
                     THF四氢呋喃
                     95％乙腈/5％水
                     再走流动相即可

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发表于 2015-4-21 16:40 资料个人空间短消息加为好友

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我用的40%的水相，柱效下降的也惊人，我都用到第五根了

remonte[使用道具]
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常说的氨基柱是指硅胶基质的氨基柱--在硅胶上键合氨丙基。此键合相很容易水解，故流动相中水的比例不能太高，GRACE Alltech有一种聚合物基质氨基柱，氨基零水解，在通纯水的情况接ELSD检测器，基线和没接色谱柱时一样。下面是该柱子ELSD连用分析糖的色谱图

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