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标题:【求助】分析短链季铵盐,用三氟乙酸离子对,..

何去何从[使用道具]
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【求助】分析短链季铵盐,用三氟乙酸离子对,..

分析短链季铵盐,色谱柱WATERS XTERRA RP18,用三氟乙酸离子对试剂,加三乙胺调pH值,发现色谱柱被污染,可能是三乙胺在色谱柱上强烈吸附。
详细情况见下列图。
条件一A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸(pH1.90)  梯度:5%A——80%A,15min
(不加三乙胺,几峰能达到分离,但峰形较宽)

条件二A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸(pH2.2,用TEA调)  梯度:5%A——80%A,15min
(加三乙胺,想改善峰形,结果分离度变差,拖尾更严重)

条件三A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸(pH3.3,用TEA调)  梯度:5%A——80%A,15min
(加三乙胺,想改善峰形,结果分离度变差,拖尾更严重)

条件四A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸(pH4.5,用TEA调)  梯度:5%A——80%A,15min
(加三乙胺,想改善峰形,结果分离度变差,拖尾更严重)

然后再重复做条件一A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸(pH1.90)  梯度:5%A——80%A,15min
发现再也重复不到原来情况。

用低流量甲醇洗柱过夜重复做条件一A:乙腈  B:0.1%三氟乙酸(pH1.90)  梯度:5%A——80%A,15min
情况还是一样。

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何去何从[使用道具]
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我现在怀疑是色谱柱的问题,我换了一更新的未曾使用C8柱,色谱图还可以。
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langlang[使用道具]
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反相色谱柱的PH范围是2-8,是不是lz之前使用的PH过低,对柱子造成不可逆的破坏呢?先冲冲柱子,不行的话就只能换一根了
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dog002[使用道具]
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首先,我们明白,在反相C18色谱柱上的保留、分离,基于目标物与C18的相互作用力,这种作用力最主要的是疏水作用力。

其次,拖尾等,很大程度上是因为目标物(尤其是碱性化合物)与硅胶表面的硅醇基发生了二级反应。硅胶表面硅醇的活性,用PKa表示,约2.5左右。

那么,我们可以通过两种方式对分离差、拖尾的分析对性优化:

1、在低PH条件下,硅胶表面硅醇基没电离,活性小,减少拖尾;从您的实验不难发现这一点,不知您是否发现了,PH1.9的效果好一些,其他PH条件下(2.2、3.3、4.5等)效果差。

2、添加酸、碱等PH调节剂,使目标物呈分子状态,增强目标物与C18的作用,即,对于酸性化合物,PH小于其PKa两单位;对于碱性化合物,PH大于其PKa两单位。
短链的季铵盐,显然是一个很强的碱性化合物,季铵的PKa约10.7,此时调节PH在11左右,相信效果会好一些。

以上是个人看法,如果您需要详细材料,或者更好的解决方式,请告诉我您具体的目标物是什么?样品是什么?也可Q我845199055。

祝顺利!
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kewanqi2011[使用道具]
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顶楼上,流动相调节合适的PH值是王道
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xevin[使用道具]
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弱酸弱碱及盐之类的物质,调节pH很重要的。
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abc816[使用道具]
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对的,调PH值很重要,三乙胺因为难溶于水,所以还是不加为好。既然PH值低了不行,那你调高PH试试,另外4楼说调节PH在11左右不对

吧,柱子能抗得住不?
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woshi[使用道具]
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会不会是ph太低了
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dior[使用道具]
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用点缓冲盐试试

另外

在开发方法,更换流动相的时候中间最好用水/有机过渡一下

频繁的换pH,柱子可能吃不消的
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DNA[使用道具]
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虽然0.1%TFA的PH偏低,但WATERS XTERRA RP18能扛得住的。

还是充分清洗及平衡柱子先。
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