分析标准与方法

做加样回收率要注意：
1.称取供试品的量应当为正常量的一半，即，如果你供试品含量测定时称样量为1g，那么在此应当取0.5g，而该样品的含量应当是已知的（可先取5批样品进样分析，带入标曲计算含量或用外标法计算，然后求出一半的含量）
2.加样的量应当是供试品中物质含量一半的80%、100%和120%
3.计算时应当是用总含量减去0.5g供试品中的含量，以此差值与实际加入量相比，求算回收率以及RSD

你的峰面积与对照的差异比较大，最好在90%--110%.

供试品和对照品溶液的制备
1. 对照品溶液 精密称取氢溴酸东莨菪碱10.18mg，置10ml容量瓶中，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含1.018mg的溶液（东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445）。
2. 供试品溶液 精密量取本品溶液5ml，置锥形瓶中，加入2mol/L盐酸溶液30ml，超声处理（功率250W，频率40kHz）30分钟，放冷，滤过，滤渣和滤器用2mol/L盐酸溶液分数次洗涤，合并滤液和洗液，用浓氨试液调节pH值至9，用三氯甲烷振摇提取4次，每次30ml，合并三氯甲烷液，回收容剂至干，残渣用0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。
我用的是面积外标法计算：
我的计算公式为：样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445
对照品峰面积分别为12405085,2403604
样品峰面积分别为
6983970.5
6922532
6949904.5
6957659.5
6965083.5
我计算的含量分别为
0.078mg/ml
0.077 mg/ml
0.077 mg/ml
0.077 mg/ml
0.077 mg/ml
加样回收率试验
1. 对照品溶液的制备 精密称取氢溴酸东莨菪碱对照品约7.8mg，置100ml的容量瓶内，加0.07mol/L磷酸钠溶液（用磷酸调pH至6.0）使溶解，并稀释至刻度，即得。
2. 采用加样回收率测定方法，精密量取已知含量的样品2.5ml，精密加入上述对照品溶液2.5ml，按供试品溶液制备方法平行制得6份供试品溶液，依法测定。
回收率=（测的东莨菪碱含量—样品中东莨菪碱含量）/加入东莨菪碱量
我的计算公式为：样品峰面积×7.8mg×98%×2倍稀释÷对照品峰面积÷2.5ml÷100倍稀释÷1.445
加样对照峰面积分别为
1435563.25
1415782.625
加样回收样品峰面积分别为
3433927.75
3418554.25
3503073.25
3477568.5
3489245.25
3473198.5计算结果
原有量（mg）        加入量（mg）        测得量（mg）        回收率（%）
0.1925        0.195        0.51        163
0.1925        0.195        0.505        160
0.1925        0.195        0.52        168
0.1925        0.195        0.515        165
0.1925        0.195        0.52        168
0.1925        0.195        0.515        165

我的试验设置，及方法是否正确？

加样回收率应为分别加入80%、100%、120%三个浓度各三份，测得结果后算9个值的平均回收率及相应RSD%

我的计算公式为：样品峰面积×10.18mg×98%×1倍稀释÷对照品峰面积÷5ml÷10倍稀释÷1.445

这里面的98%和1.445是什么

你的回÷收率里面的计算公式，我认为有问题，你检测的是整个溶液当中的量，下面÷的2.5是什么呢，我也弄混了，不知道公式应该是什么样咯

98%是对照品的含量；东莨菪碱重量=氢溴酸东莨菪碱/1.445，测定的是氢溴酸东蒗菪碱，含量要求以东蒗菪碱计，加样回收率计算公式：样品峰面积×7.8mg×98%×2倍稀释÷对照品峰面积÷2.5ml÷100倍稀释÷1.445中的2.5ml是样品的取样量。

"对照品峰面积分别为12405085,2403604",为什么有两个数据，而且相差那么大？

计算样品含量时，"精密量取本品溶液5ml......溶解并移至5ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得" 5ml本品溶液------5ml供试品溶液，相当于供试品溶液没有稀释，你的计算中为何还有一个5ml？

你的样品测定过程中还有一个最大的问题就是我原来提到的用单点校正法对照和供试品峰面积一致才有可计算性。你可以自己算一算，一般来讲，色谱条件相同的条件下，不是同一天进样，同一个溶液的峰面积不会相差很大。而前后两个对照浓度比：10.18/7.8*10=13.05，峰面积比：12405085 /1435563.25=8.64,可见，峰面积与浓度不是简单的正比关系。所以对照和供试峰面积差得较多时，计算结果根本不对。我见你做过线性，也就是标准曲线，这种情况应该用你的标准曲线计算。原有量，加入量数值好像都不对，原有量应该乘以5（而且需要用标准曲线计算），加入量你没有除以1.445.

因为我也不太清楚你的实验，说的不对的地方还请见谅。

刚刚又重新作了一下，我加样回收中对照品称量为7.77mg溶到100ml，对照品的峰面积为899824.125；因为我测定的样品平均含量为0.077mg/ml，所以在加样回收中，我样品取样为2.5ml（为含量测定时样品取样量的一半），我按照样品含量（2.5ml*0.077mg/ml=0.1925mg）的80%，100%，120%分别加入对照品2ml，2.5ml，3ml到供试品溶液中，同时我又做了只加2.5ml样品，只加2.5ml对照品，以及阴性溶液加入2.5ml对照品，试验结果如下：只加入2.5ml样品的峰面积为2794906.5；只加2.5ml对照品的峰面积为287700.906；阴性溶液中加2.5ml对照品的峰面积为424595.875；80%，100%，120%分别加入对照品2ml，2.5ml，3ml的峰面积分别为3369103.25，3736954.75，3965197.5。通过计算还是不行，请大家好好看一下，看看有什么不合理的地方，正确的计算公式是什么？


还有一个问题: 在测定样品含量时，对照品的浓度是按照药典中单味药材中含量测定时对照品浓度制备，还是随机制备一个浓度，有什么要求吗，该如何选择对照品的浓度？比如我制备的对照品浓度为10.81mg到100ml中，其峰面积为3596993.75，我又作了一个二步稀释（取2ml到25ml量瓶），其峰面积为432850.5，侧出来的样品含量差别比较大。