小中大线粒体提取方法 :
1.准备好所需试剂，然后拿到组织；
2.迅速取的需要的组织，注意除去多余的脂肪、胶原等；
3.立即将取下的组织按大约5倍于组织体积的量加入已用冰预冷的含有EDTA的MSH缓冲液清洗，擦干、称重并用剪刀剪碎置入匀浆瓶中；
4.重复清洗步骤，直到清洗液干净为止；（在倒掉清洗液的过程中注意不要将组织倒出匀浆瓶）
5.以5mL/g组织加入匀浆液；加入蛋白酶抑制剂5μL/ mg（按比例增减加入量）
6.以500 rpm匀浆充分；
7.将匀浆后的组织分装于两个合适大小的离心管中离心，1,300×g，3min，
8.除去脂肪层和上清，加入适量MIB（尽量多加），重悬至看不到颗粒状物质为止；
9.离心15,000×g，10min；
10.转移上清（包含线粒体）至一新的离心管中，离心15,000×g，10 min；
11.弃上清，用2 mL MIB重悬沉淀；
12...向4个BECKMAN超高速离心管中各加2 mL 10%/3 mL 7.5% Ficoll液；
13.吸取2mL线粒体粗体液轻轻地加到Ficoll液面上；
14.务必用Ficoll液平衡，因为是超速离心；
15.离心49,000 rpm （Beckman Ti60 rotor），约100,000×g，90 min；
16.小心取下转子，小心取下离心管；
17.线粒体层位于过氧化物酶体层的下方，分离步骤如下：
a.用吸管除去上清（含有微粒体、过氧化物酶体等，若是提取脑组织则含有突触体）
b.用吸管小心吸取线粒体层加入另一离心管中
18.分别向两离心管中加入等量的MIB，平衡；
19.离心15,000×g，10 min，去除Ficoll；
20.去上清，用含BSA的Buffer A重悬线粒体，
21.离心9,800×g，10 min
22.加4 mLMIB重悬,15,000×g，5 min
23.除上清,加300μLMIB重悬,并转移至一新的1.5 mL离心管中,存于-80℃；
分离、提取的结果经电镜观察以确定线粒体的纯度和完整性。
附：
MSH: 210 mM mannitol, 70 mM sucrose, 5 mM Hepes, pH 7.35 4°C, 2 M KOH
MIB: Mitochondrial Isolation Buffer
PMSF: Phenylmethanesulfonyl fluoride
提取细胞中就是10的7次方细胞加1ml裂解液。别的都一样
用于测药物对线粒体膜电位的作用：我 建议无菌操作，以免影响药物的作用结果！
内容仅供参考，希望 对你有帮助！
