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标题:【求助】提RNA测260/280小于2是为什么？

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发表于 2015-4-28 09:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】提RNA测260/280小于2是为什么？

提RNA的时候测260/280=1.4,1.6,1.8 测的三个样本都小于2.提取的时候加triozl的时候没有用枪反复吹吸，直接加完以后就静置了5分钟，这是一个错。另一个错是加完氯仿后，没有涡旋混匀，只轻轻的晃了几下。然后忘记加异丙醇，直接去离心，离了三分钟后突然想起来，然后又反过来加异丙醇。最后测RNA260/280得到的结果是均<2 三个样本的值是1.4，1.6，1.8.浓度分别是400，600，700ug/ml.最后用异丙醇沉淀以后基本上看不到胶冻状沉淀，用75%乙醇抽提后可以看到少量的白色沉淀，请问白色沉淀是RNA吗？为什么纯度都这么低1.4？？？加完异丙醇后离心，因为看不到东西，就没有完全吸干净EP管里的样品。会不会是这步有影响？然后加乙醇离心后也没有完全把乙醇甩干净。会不会也产生影响？
请问是哪一步出了问题？
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bongte[使用道具]
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发表于 2015-4-28 09:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #1 join 的帖子

混有DNA了。。。。。。
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xyw5[使用道具]
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发表于 2015-4-28 09:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
什么混有dna，明显rna含量低嘛！ A260是核酸的吸光度值
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caihong[使用道具]
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发表于 2015-4-28 09:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

重新提啊，这么简单
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junhun[使用道具]
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发表于 2015-4-28 09:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我今天提RNA,也存在这个问题，步骤倒是没少，就是纯度不高，急人！！
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发表于 2015-4-28 09:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人认为值低主要是你后面异丙醇没有完全吸干净。也应尽量去干净乙醇。看样你也是刚做，多提几次就好了
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发表于 2015-4-28 09:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
做的时候，不要慌。看清楚了再去做，只有每一步都做好了，结果才会好!
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了了[使用道具]
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发表于 2015-4-28 09:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提的RNA基本没用，重新提吧！
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S6044[使用道具]
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发表于 2015-4-28 09:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室一般认为260/280在1.8--2.0都可以啊
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发表于 2015-4-28 09:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也是提了好几次才提出来，前几次比值一直在1.5~17~之间浮动，简直郁闷死了，不过最后一次比值1.92，总算提出来了
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