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标题:【求助】荧光定量PCR的结果讨论

dog002[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】荧光定量PCR的结果讨论

本人做的荧光定量pcr，结果如图所示。绿色是内参基因，黑色是目标基因对照，红、黄、蓝色分别是三种不同处理后目标基因的表达情况。红黄蓝三线堆积在一起，说明什么样的问题？请各位网友讨论讨论，评价一下实验效果如何。


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JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

挺好的，没有非特异性扩增
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abc816[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个荧光定量的溶解曲线说明特异性很好。文献一般不用把这个图当做Fig贴上。
验证作用，只是荧光定量结果的一部分。
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是融解曲线，只是验证有没有非特异性扩增，如果你要看用药和没有用药目标基因的表达量，得看CT值 ，
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yizhi[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
跑的挺好
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有二聚体和非特异性扩增，非常典型的图
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am10[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这只是一个溶解曲线。结果还不错。
但是分析数据，不是靠这个。如楼上所说，CT值。
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any333[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你用的应该是荧光染料，他对模板没有选择性，所以特异性不如Taqman探针法。熔解曲线就是弥补这一特性的实验。你的图说明PCR反应的特异性不错，也就是你的引物设计、纯度和PCR设置程序没问题。
希望能帮到你！
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bring[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主要把各个CT值跟内参比照做相对定量
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2015-4-28 15:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有二聚体和非特异性扩增，这只是熔解曲线看来还可以主要是看CT值得
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