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标题:【求助】PCR没有条带，全是拖带

superboy[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR没有条带，全是拖带


做pcr，第一空是阴性对照，其它孔是阳性样品，目的条带980，DL2000的MARKER，大家帮我出出主意怎样改进啊？
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bring[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我提取dna时是这种情况
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remonte[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以尝试温度梯度pcr摸索扩增最适温度。如果还是这样的话，那就有可能是引物特异性不好了。
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dior[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

看样子，条带都在100bp那位置，引物二聚体很严重呢，marker跑成弥散，是不是胶配得不好？
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，这不是胶的问题，有两种可能，（1）退火温度高了，(2)引物特异性差了。温度梯度PCR可以一次解决上诉两个问题....
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ssonglikihi[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个不是胶的问题……
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fox_79[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
退火温度降低一些，循环数减少一些。
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u234[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
梯度温度就可以了
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 fox_79 于 2015-4-29 16:40 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
退火温度降低一些，循环数减少一些。

我认为应该是退火温度提高一点 可以跑温度梯度PCR 因为是弥散拖尾的条带 提示引物特异性不好 可以和其他位置结合进而扩增出杂带 所以退火温度提高；如果减低退火温度的话 在引物特异性不好的情况下 那不就有更多的杂带了吗？；至于温度梯度PCR可以跑升温的 也可以跑降温的。
我也是PCR新手 这是我的理解 请大家纠正，谢谢！
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xuuuu[使用道具]
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发表于 2015-4-29 16:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我敢保证绝对不是胶的问题，我觉得是你的引物有问题。你做的是PCR还是RT-PCR？
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