【求助】蜂种分子鉴定中PCR后跑电泳条带...

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标题:【求助】蜂种分子鉴定中PCR后跑电泳条带...

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发表于 2015-4-29 17:03 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图1 跑电泳的TBE使用时间长 1倍琼脂糖

附件

2015-4-29 17:03

水田螟黄、豆田螟黄、萝卜螟黄没条带.jpg (26.35 KB)

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发表于 2015-4-29 17:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图2 新配TBE 1倍琼脂糖

附件

2015-4-29 17:04

水田螟黄（MC3、MX2）、豆田螟黄、萝卜螟黄.jpg (25.97 KB)

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发表于 2015-4-29 17:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图3新配TBE 2倍琼脂糖

附件

2015-4-29 17:04

DMC1...DMC6(螟引)新配TBE.jpg (10.58 KB)

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发表于 2015-4-29 17:04 资料个人空间短消息加为好友

小中大

图5 pcr中退火55度

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2015-4-29 17:04

玉米螟YC1、YC2、...YC13 YX1、...YX7（玉引）.jpg (12.26 KB)

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发表于 2015-4-29 17:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问：
1、出现条带了，但有拖尾是什么原因；如图4
2、没出现条带或者部分出现模糊条带，但每个样子的电泳路径上有明显的白色是什么原因；如图2和3
3、图1中没有条带，而且明显从梳空开始有明显不同于其它图的白色，什么问题；
4、图5中在应该出现条带的位置上下出现明显的白色，提高退火温度和增加琼脂糖浓度到1.5倍、2倍仍然如此，为什么？

请大侠们帮我详细解答下，灰常谢谢！！！

dog002[使用道具]
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发表于 2015-4-29 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

额，可能是退火温度的原因吧

dog002[使用道具]
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发表于 2015-4-29 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

每一次电泳时PCR条件都不一样么？退火温度做个梯度吧？

remonte[使用道具]
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发表于 2015-4-29 17:26 资料个人空间短消息加为好友

小中大

点样孔放在上面吧，看起来很不顺
DNA有蛋白质污染，引物好像不合适，有二聚体，DNA有降解，电压会不会太大啦？

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发表于 2015-4-29 17:27 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 dog002 于 2015-4-29 17:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
额，可能是退火温度的原因吧

退火温度都是一样的555

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发表于 2015-4-29 17:28 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 remonte 于 2015-4-29 17:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

点样孔放在上面吧，看起来很不顺
DNA有蛋白质污染，引物好像不合适，有二聚体，DNA有降解，电压会不会太大啦？

谢谢大侠，这个电压下，跑电泳有条带亮的，就是最近几次的电泳跑得出现图片上的问题。

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