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标题:【求助】 pCR拖尾，没有目的条带

fei1226com[使用道具]
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发表于 2015-4-30 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 pCR拖尾，没有目的条带

什么原因会导致拖尾，有没有什么改进方法
marker边的带是模板


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2015-4-30 14:17
2011-12-14a.jpg (1.25 MB)
 
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发表于 2015-4-30 14:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

退火温度太低了吧？
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发表于 2015-4-30 14:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 veiwu 于 2015-4-30 14:17 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

退火温度太低了吧？

用的是two-step protocol，没有退火，直接变性，延伸
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veiwu[使用道具]
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发表于 2015-4-30 14:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 fei1226com 于 2015-4-30 14:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

用的是two-step protocol，没有退火，直接变性，延伸

哦。那你又重新做了没有？
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ending[使用道具]
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发表于 2015-4-30 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，可以不用退火？那不如用标准pcr三步骤试试看吧
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发表于 2015-4-30 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不过就是标准也会出现这种拖尾而且没有目的带，那样原因就多了，是不是dNTPs，酶什么的原因呢。
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2015-4-30 14:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 ending 于 2015-4-30 14:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

呵呵，可以不用退火？那不如用标准pcr三步骤试试看吧

最开始用的是三步法，结果什么都没有P出来，只有引物二聚体
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2015-4-30 14:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ending 于 2015-4-30 14:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不过就是标准也会出现这种拖尾而且没有目的带，那样原因就多了，是不是dNTPs，酶什么的原因呢。

下次换换酶，试试能不能P出来，谢谢
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fei1226com[使用道具]
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发表于 2015-4-30 14:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 veiwu 于 2015-4-30 14:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

哦。那你又重新做了没有？

重新做了，结果照旧，谢谢
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-4-30 14:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
换个酶试试，再确认一下模板有没有问题
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