【求助】聚丙烯酰胺电泳洗胶过程

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标题:【求助】聚丙烯酰胺电泳洗胶过程

JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-4-30 15:15 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你们好，各位！这是我第一次跑的聚丙烯酰胺电泳的图片，请各位赐教。

1，怎样保证胶的整齐和条带的整齐，你们是怎么做到的？
2，我这个电泳是否还可以跑一段时间（我结束电泳的时候着色部分离底部已经很近了，为什么上部还是很拥挤）？
3，我在加显影液的时候，胶的部分地方突然变黑，弄的胶的整个版面染色不均匀，这是为啥？
4，拍摄时，你们在胶的底部一般垫些什么，或者放在什么地方的？
5，染色液和显影液能重复使用么？
6，胶的底色（黄色）的深浅由什么决定的？我的图染色不一样？

marker在右端，点样我取的是引物梯度pcr里面的三个不同温度下的样，共15*3（）+2孔（marker）

附件

2015-4-30 15:15

17-21号引物1.JPG (156.38 KB)

2015-4-30 15:15

12-16号引物2.JPG (164.67 KB)

am10[使用道具]
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发表于 2015-4-30 15:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你跑电泳的条件，胶的厚度，还有胶的配方是什么

JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-4-30 15:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电压33伏，电流6IA。。。

dog002[使用道具]
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发表于 2015-4-30 15:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

胶的厚度为1mm

ldh[使用道具]
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发表于 2015-4-30 15:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

条带整齐程度取决于胶和玻璃板的平整程度，有时候胶太大，玻璃板中间会塌下去。
一般第一条buffer跑到2/3的地方就差不多了，当然如果你确定只有一条条带的话可以在一块板上反复上样。
如果银染的话，AgNo3要确保完全溶解了，这个东西不是很好溶。还有天冷的时候，染色效果不佳，可以考虑用热水。
银染的话，染色液可以反复用，显色液则需要即使更换

any333[使用道具]
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发表于 2015-4-30 15:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

部分地方变黑是因为摇晃不均匀，胶的颜色漂洗完后会随着时间的推移变得越来越深的，拍照的话可以找个白色的塑料板垫着啊。

JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-4-30 15:19 资料个人空间短消息加为好友

小中大

却是如阁下所说，我这张是用的白纸，沾上水之后色差虽然好但却增加了皱折。已经找到好的替代物了。染色液我试试反复用，看看效果如何。
谢谢你！

october7[使用道具]
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