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标题:【求助】PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳，结果看不到任何条带...

tie8[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳，结果看不到任何条带...

我现在做的pcr是用cDNA为模板，设计兼并引物，扩增目的片段，可每次电泳后什么都看不到，连引物二聚体都没有，退火温度比引物设计时给的已经降了5度，还是什么都看不到，模板的量从1微升升高到4微升了，结果还是什么都看不到。究竟是什么问题啊！请各位多多指教！！
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tudou85[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得有可能是酶或dNTP失效了，
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veiwu[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
没有染色
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发表于 2015-4-30 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能电泳缓冲液有问题了，换换新的试试，我以前遇到过的
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newway[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

模版浓度过高？模版减少到0.5ul试试！
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bring[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你可以用反转录试剂盒里面给定的引物加上自己的cDNA做PCR试试，这个相当于对照，如果这个能扩增出来，那说明反应过程没什么问题，应该是你的引物有问题，如果这个出不来，那问题就比较多了。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

引物二聚体没有，说明体系在PCR过程中没有怎么反应。可以考虑加样是否有错误？酶、DNTP是否无效？
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S6044[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我现在与楼主遇到了同样的问题，琼脂糖凝胶电泳结果除了marker亮其他的一片漆黑，急切想知道问题出在哪？请问楼主你解决了吗？怎么解决的？
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