【求助】再次请教有关半定量RT

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标题:【求助】再次请教有关半定量RT

xingyi08[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:16 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我听别人说有用DNA marker做半定量RT-pcr用，我想请教几个问题：
1.DNA marker的作用和beta-actin是否一样？这两者能否分别单独进行本定量？
2.如果这两者都能单独作半定量，哪一种特异性更高一点？哪一种更常用一些？

请各位高手不吝赐教！十分感谢！

dog002[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我认为这是内标和外标的关系！

DNA marker是可用来半定量，算外标准。

而如果你由于取材、逆转录或PCR产生的差异只有内标准可以排除。

例如：逆转录的产物做beta-actin和目的基因的PCR反应，反应体系相同只是引物不同，可以排除扩增的差异。

请大家指正！

KGZ564[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:17 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在这里我再提供两个建议。
1. 如有可能尽量做同管扩增，即内参照和你的目的基因在一个体系中同时扩增，这样的数据则更有说服力。
2. 做半定量PCR一定要先摸一下PCR循环数，因为PCR产物的量一开始是一个接近直线的上升期，到了一定循环后，就为一个平台期。而坐半定量一定要把循环数控制在平台期之前，否则没有意义。这一点非常重要。

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:18 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢两位朋友的热心帮助！我是临床专业，最这些东西不是太懂，能得到大家的帮助十分高兴，我马上就要做实验了，如果实验中有问题，还要向大家请教！

dior[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:20 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我想请教wizard朋友如何确定合适的循环数使半定量RT-PCR的扩增产物递增在平台期以前呢？谢谢

xue258[使用道具]
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