【求助】大肠杆菌菌液直接PCR

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标题:【求助】大肠杆菌菌液直接PCR

birdfish[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

为什么大肠杆菌菌液可以直接pcr？不需要先破坏细胞壁么？

am10[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这个是菌落PCR，不用事先处理菌液的，我认为PCR的94℃就能破坏它的细胞壁吧，个人意见……

33号[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

不用啦，直接做就好了

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发表于 2015-4-30 16:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

PCR程序一开始的95℃就可以破坏细菌的细胞壁，使基因组暴露出来。有点类似于煮沸法提取DNA。而且请放心，暴露出来的DNA量基本上足够做PCR的模板了，一般情况下用1ul过夜菌的话不会有问题。鄙人愚见，仅供参考~

woshi[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问，需要摇菌多久就可以PCR了？一般是过夜，短些时间大概多久可以？老板说5个小时，不清楚，请教一下大家，谢谢

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

5-6小时即可

whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

2~3h

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

嗯，是滴~过夜只是保证摇出来而已。

mimili_901[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

那PCR的95度要几分钟呢？

cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-4-30 16:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一般94-95度，十分钟

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