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标题:【求助】求助

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发表于 2015-5-6 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】求助


亲和层析后的抗体经过不同的pH处理后，调至中性，然后用PBS稀释成1mg/ml，上样跑非还原电泳，竟然这么多杂带，但是SEC检测的结果是97~98%的纯度，这么矛盾的数据，难道SDS哪里出问题了？
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发表于 2015-5-6 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SEC很粗糙的，很多情况下分不开的
另外看看处理过程中，是不是蛋白降解，你这一长溜的，很难说的。
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2015-5-6 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品处理的时候，加热过头了
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发表于 2015-5-6 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 mimili_901 于 2015-5-6 17:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

样品处理的时候，加热过头了

没有加热，直接用的非还原缓冲液跟样品混合，直接上样的。奇怪的是，这个工艺出来的亲和样品一般纯度都可以达到95以上的。怎么SDS出来就那么一连串的降解物似的。
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 小中大


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原帖由 mimili_901 于 2015-5-6 17:38 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

样品处理的时候，加热过头了

没有加热，直接用的非还原缓冲液跟样品混合，直接上样的。奇怪的是，这个工艺出来的亲和样品一般纯度都可以达到95以上的。怎么SDS出来就那么一连串的降解物似的。
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发表于 2015-5-6 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 我是新人 于 2015-5-6 17:39 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

没有加热，直接用的非还原缓冲液跟样品混合，直接上样的。奇怪的是，这个工艺出来的亲和样品一般纯度都可以达到95以上的。怎么SDS出来就那么一连串的降解物似的。 ...

你确定SEC方法没问题？
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发表于 2015-5-6 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 mimili_901 于 2015-5-6 17:41 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

你确定SEC方法没问题？

怎么说呢？因为这个方法是质检那边做的，他们说已经经过了验证。还有其他样品SEC测出来99%，电泳结果也是相对符合的，就是右边的那几个样品。所以我就困惑了。
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发表于 2015-5-6 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不好意思，没有上图。也就是说用这个SEC测的一个样品纯度99%，然后跑的SDS电泳基本也是一条很纯的带。
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 小中大


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原帖由 我是新人 于 2015-5-6 17:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
不好意思，没有上图。也就是说用这个SEC测的一个样品纯度99%，然后跑的SDS电泳基本也是一条很纯的带。

要么是电泳没跑开，要么是检测方法不稳定，要么就是你的东西真……降解了
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 小中大


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原帖由 mimili_901 于 2015-5-6 17:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

要么是电泳没跑开，要么是检测方法不稳定，要么就是你的东西真……降解了

是的~所以我认为SDS电泳应该是可信的
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