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1、关于乳酸的控制控制有哪些比较好的策略,根据以往的经验就是就是降低糖浓度,结果是有的时候管用有的时候不管用,对于下面的工艺开发就比较头疼了。
2、能否推荐一下关于反应器及工艺优化方面的介绍书籍,增加自己对这方面认识。
反应器产量有了过程参数的精确控制(pH/DO/temp),流加方案的优化,关键代谢指标的控制(糖、乳酸、谷氨酰胺、氨),应该有较大幅度的提高(30%),当然这个是case by case的,不能一概而论,更多的依赖于细胞株潜力和平台化的培养工艺开发效率。
2、培养基优化的常规方法与思路(参考《用于重组抗体生产的细胞大规模培养工艺开发》)
3、不仅大豆水解物,还有小麦水解物,酵母水解物,肯定是要淘汰的。这些添加物本身成分不明确,质量不可控。培养基的发展方向是CD,即化学成分明晰。
4、目前国内新上项目应该在2g/L左右。 如果不考虑具体的品种,市场容量对产能的要求。个人感觉4g/L没有必要。 重组抗体的产业化工艺开发不仅是细胞培养这一个环节。TITER过高对于下游的压力。对于产品质量的影响,都应该考虑。
1)控制乳酸,
首先应考虑葡糖糖的限制性流加策略,即根据细胞的葡萄糖消耗速率进行培养基流加。考虑到葡萄糖浓度控制过低(<1g/L)时,培养基中其他营养成分可能消耗殆尽,一般残糖的控制水平可以控制在2-5g/L左右。
目前商品化的培养基及流加策略,都有可供参考的protocal,可以直接在此基础上进行工艺优化。
文献中报道的乳酸阈值(影响细胞生长、抗体质量的乳酸浓度)58mM,l流加培养操作模式下,一般很少能达到。
其次,细胞培养工艺中pH的控制,对乳酸的生成也有影响。一般情况下,pH控制高,即偏碱的环境是刺激细胞产酸的。所以一般表达重组蛋白的培养工艺中,生产期的pH要控制的偏酸性。
最后,溶氧不足也会造成细胞无氧呼吸,代谢产酸的。
至于报道的使用半乳糖替代葡萄糖,不做推荐。
2) 细胞培养的参考书籍
推荐hu weishou 《Cell Culture Technology for Pharmaceutical and Cell-Based Therapies》google可以查到免费电子版本。