小中大【求助】用过transwell或养过Caco-2细胞的请进
我养Caco-2细胞,现在已经接种到6孔培养板的插入式小室(即在6孔培养板的每个孔中再加单独的小室,transwell,让Caco-2细胞长在小室的膜上),目前存在的问题是:1.细胞接种不均匀,我已在园内搜索了一些接种技巧,按照那些方法不是很有效,细胞全部集中在中间;2.细胞换液后,原来贴壁的细胞都脱落了,连在一起,用肉眼可见细胞培养液中有白色漂浮物,估计是死细胞,我以为是换液动作太粗鲁了,再换液时又加倍小心,可是那些漂浮物依然存在,不能通过换液除去;3.文献说Caco-2细胞在膜上长5-7天就可以长满,可是7天了,镜下观察,依然是中间有细胞,周围很少,怎么回事呢?有明白的高手请指点一下吧,不胜感激!