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标题:【求助】用过transwell或养过Caco-2细胞的请进

dog002[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
顶,学习,请问大家有没什么资料可以共享啊,我也要养caco-2细胞了.什么都不懂啊
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gmjghh[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看到这个帖子太激动了，遇到这么多有经验的同行，多多指教啊，我养这个细胞半年多了，一直是在25平方厘米的培养瓶里面养，但是非常糟糕，刚开始长的很好，1：3传代都差不多第三天就长满了，可是传过几代后就越来越不好了，贴壁活的越来越少，而且瓶子中间部分扎堆，边缘却越来越少，并且生长缓慢，而中间越挤越密会出现很多空泡，慢慢就都死掉了。并且培养期间培养液很脏，很多黑色物质，但是培养基颜色没有变黄也不浑浊。请问有人知道这是怎么回事吗？
PS：纹路和serchina分别是北京和南京什么单位啊？还在养这个细胞吗？我是石家庄，可以好好交流下吗？
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caihong[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
跟HT29的情况差不多
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箭头儿[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
原因可能是细胞消化不彻底，只消化到了块状的细胞团，就简单吹散就传代了，块状的细胞团换液时就丢失了，这种情况下细胞越传代数量就越少。这个细胞在局部融合后就会形成紧密连接，光学显微镜下观察像网格样结构，很难消化分散。
解决办法：
（1）PBS洗1~2次后，37度的胰酶消化5~20min，镜下观察直到用手轻拍就有大量单个细胞脱落，
（2）对于传代后的细胞，每次传代的细胞不要培养太长时间，<5~7d，按照这样两点基本可以解决培养问题了。
另外培养过程中，有些细胞分泌物分泌到培养基中，镜下可以见到絮状颗粒，PBS冲洗2~3次就可以去除了。
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笑弯了腰[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的情况正好与你相反，用的是玻璃瓶，总是中间少，边缘多，周围好多同学也都出现了这种情况，不知道是什么原因？
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笑弯了腰[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不知道什么情况 我的HT-29长着长着就出问题，不怎么贴壁，并且细胞间很多颗粒物，难道是培养基有点偏碱的原因吗？谢谢！
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发表于 2015-5-11 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教：我的Caco-2一般都是1：3或1：2的传代，不知道怎么回事，昨天传的有点稀，今天一看细胞几乎都不贴壁，也不知道是密度小的问题还是培养基有点偏碱的问题，请问大家遇见过这样的情况吗？需要怎么补救啊？
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发表于 2015-5-11 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
（1）insert 内一般不用铺胶，适量的细胞在膜上分散均匀就行了，
（2）在配制DMEM培养基时，用pH计测量，试纸比较粗糙，主观因素大，另外每次传代时都进行细胞计数，做好记录。至于细胞不贴壁，我不好说，培养基偏碱可能性比较大，，一般这个细胞传代后2~4h就大部分贴壁了，11/11到现在时间比较长了，如果有1/3贴壁就更换新鲜培养基培养，贴壁的细胞太少就没有好的补救措施了，重新配制培养基，复苏细胞，传代3次后可以实验了，估计10~20天吧。
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shkudo[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
非常感谢！虽然细胞密度很小我还是决定明天消化下，看看情况有没有改善。另外我11号复苏了一管效果非常不好，没有离心，也没有几个贴壁的，好郁闷啊！
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你的膜上铺胶了吗？是哪个公司的啊？铺时都需要注意哪些？谢谢！

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你好！我之前询问过前辈，他们都说transwell可以不用铺胶的，因为铺胶的目的是增强细胞贴壁，caco-2在transwelll膜上本身贴壁就很牢固，不知道你试过没有，在膜上生长20多天的caco-2，是没法消化下来的，清洗膜时就是用棉球擦拭，也需要反复几次才能干净。
我没有铺胶，长着的细胞也很好。
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