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标题:【求助】用过transwell或养过Caco-2细胞的请进

milkdog[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
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楼上的，我是新手，能否传几张长的比较好的caco-2细胞的图片看看，怎么感觉这个细胞长的有点怪，（可能看惯肿瘤细胞了），呵呵
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feiya[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的细胞都快长没了，不知道什么原因，传代后一层一层的细胞死亡，真崩溃！
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popo520[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对于改善 caco-2细胞生长状态，有以下几点：
1、提高血清浓度
2、勤传代，勤换液，防止细胞老化
3、传代时，细胞密度不宜过低
4、消化时间3-5min，我用Hyclone的胰酶，吹打时注意力度
5、离心2次，第一次800转，3 min，倒上清，用PBS混悬，1000转，3 min
我也在millipore的膜上养细胞，细胞消化后直接种板，10^5cells/ml，21天TEER300-400,换液过程中动作一定要轻，防止把细胞膜吹起，至于细胞形态，我是用透明的膜，但镜下观察不明显
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dior[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教各位：我正在养的Caco-2细胞出现问题，电镜视野下有貌似絮状的大团漂浮物，观察培养瓶底部有白色凸出的小点，因为transwell太贵，所以试着在普通24孔板上接了一些，结果漂着的东西越长越多。肉眼就能看见大团的白色雾状漂浮物。拍了照片，可是图太大，传不上论坛上来~请教各位，是什么污染么？还是细胞死太多？（培养瓶中的细胞除了有上述漂浮物外，生长状态挺好的，3天就必须要传代了）
多谢各位指教！！
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dior[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为目前做实验的细胞房进出风口都是仓库，所以污染很大~~养Caco-2两个月来，一直都不顺利~~
现在急觅在做Caco-2的实验室，请问各位的实验室是否接受外来同学，可以以合作的形式进行，我导师可以支付费用~~烦请大家咨询下导师或老板，多谢！！祝大家细胞养得顺利~~
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dior[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

cuturl('www.bufotanine.com/html/0714/3b3c.html')
这个网址上有Caco-2的图片
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发表于 2015-5-11 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你提到的“培养过程中，有些细胞分泌物分泌到培养基中，镜下可以见到絮状颗粒，PBS冲洗2~3次就可以去除了。”请问，这些絮状颗粒到底是什么样子？我的Caco-2中有一团一团疑似死细胞的漂浮物，而且随着培养传代的进行，会逐渐增多，能观察到培养瓶中有白色颗粒状凸起，请教：这是污染还是你所指的分泌物？谢谢！！要是方便，可否告知一下邮箱，我把图片发给你，图太大，没法传到论坛上来~~多谢！！
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发表于 2015-5-11 16:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好！我用的是12孔Transwell板，不知道每孔种多少细胞合适，想听听大家的建议！谢谢！
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gmt[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
transwell细胞小室实验中upper chamber细胞数和均匀度很重要，一般在制备单细胞悬液时要求吹打均匀，100次左右，这样种的细胞就不会出现集中性或四周密集型生长的特性。而且在进行细胞计数时我们一般计数一块计数板的8个大方格细胞数/8 *10000.
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bring[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在用transwell 做的是表皮细胞,没有涂胶,感觉长的很不好. 是不是细胞密度低的原因呢? 还是在这膜上就是不容易长?
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