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标题:【求助】用过transwell或养过Caco-2细胞的请进

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发表于 2015-5-11 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问CACO-2做转运实验用的TRANSWELL的规格我们一般用多少的啊，我准备买CORING的，膜直径和膜孔径，几孔合适啊？
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想请教
在包被transwell过程中遇到问题。
想在transwell上包被matrigel，培养caco-2细胞，按照caco-2培养手册中的方法应该把I型胶原稀释成0.9mg/ml，但是matrigel说明书中除了做3d基质有浓度和量的限制以外，对于包被的说明很笼统，说按需要稀释，园子里说法很多，没有找到令我满意的答案，能不能告诉我一下，应该什么浓度，多少ug胶原/cm2，
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我给BD工程师打过电话了，他说只能在3倍稀释以内，包括包被也不能稀释太多，谢谢各位
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看到这个帖子太激动了，遇到这么多有经验的同行，多多指教啊，我养这个细胞半年多了，一直是在25平方厘米的培养瓶里面养，但是非常糟糕，刚开始长的很好，1：3传代都差不多第三天就长满了，可是传过几代后就越来越不好了，贴壁活的越来越少，而且瓶子中间部分扎堆，边缘却越来越少，并且生长缓慢，而中间越挤越密会出现很多空泡，慢慢就都死掉了。并且培养期间培养液很脏，很多黑色物质，但是培养基颜色没有变黄也不浑浊。请问有人知道这是怎么回事吗？
PS：纹路和serchina分别是北京和南京什么单位啊？还在养这个细胞吗？我是石家庄，可以好好交流下吗？
......

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我是广西的，不知道你用的培养瓶是哪个厂家的，我之前用了一种，也是这种情况，后面改用康宁的细胞培养瓶，现在细胞长得很好呀~~
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用caco-2细胞做转运试验，可是培养21天后测定电阻，扣除空白后电阻值大概就在600左右，可是做出来的结果重现性很差，不知道为什么，请高手帮帮忙，小女子万分感激！
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位战友好！
我也正在用transwell培养板养Caco-2细胞做药物运输实验。刚开始做前期的准备工作。有些问题想请教大家。
1.今天有用鼠尾胶原包被通透膜，按说明书上所说室温开盖在超净台上晾干1小时后，仍为凝固成胶。如果我今天铺胶不成功，我可以在此基础上重新铺胶吗？还是该清洗后再用呢？我该怎样清洗通透膜同时防止它染菌呢？
2.如何接种细胞使其能均匀生长？
3.如何用PBS清洗细胞？
4.如何加入、吸弃培养基不破坏细胞层？
敬请各位高手不吝赐教！
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yizhi[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

养Transwell几天后下层总会出现一些很小的东西，时间越久越多，在镜下还可以看到在动，请高手指导一下那是什么东西啊？染菌了吗？很困惑
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发表于 2015-5-11 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

污染了
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panda王[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我给BD工程师打过电话了，他说只能在3倍稀释以内，包括包被也不能稀释太多，谢谢各位

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貌似咨询有些晚了，还是想问，书上说1:8稀释呢
真的用基底胶基质取代鼠尾胶原可以吗？求具体操作，多谢！
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panda王[使用道具]
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发表于 2015-5-11 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
（1）insert 内一般不用铺胶，适量的细胞在膜上分散均匀就行了，
（2）在配制DMEM培养基时，用pH计测量，试纸比较粗糙，主观因素大，另外每次传代时都进行细胞计数，做好记录。至于细胞不贴壁，我不好说，培养基偏碱可能性比较大，，一般这个细胞传代后2~4h就大部分贴壁了，11/11到现在时间比较长了，如果有1/3贴壁就更换新鲜培养基培养，贴壁的细胞太少就没有好的补救措施了，重新配制培养基，复苏细胞，传代3次后可以实验了，估计10~20天吧。
......

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隔了好久，但从回复言语，直觉告诉我您应该做的比较成功，求指教
1、CACO-2在培养瓶中不到3天就快长满，在小室内，21天不早飘起来吗？真只用隔天换液体？
2、真不用铺鼠尾胶原，看到后面有战友7天就飘起来，求您的操作除了半换培养基之外，其他注意事项！
3、我要做的是药物干预细胞，测电阻值，小室内在电阻稳定后加含药物培养基，外层培养基加需要血清吗，具体培养及是？
拜托了
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