细胞世界

大家好，我的心肌细胞培养后，贴壁了，但是不见搏动，不知道为什么，请大家来探讨一下，谢谢.以下是我的操作步骤：1. 消化液为：0.0625%胰酶(Amresco)+0.04%胶原酶B(Roche)
2.将SD乳鼠心脏剪成小碎片，加入上述消化液3ml,第一次消化10min,弃上清。
3. 第二次及以后加入消化液3ml，每次消化4min,将上清小心吸出，加入到含10%小牛血清(GIBCO)的DMEM高糖培养基中终止消化。并将上述含有上清的离心管置于冰上。
4.如此，消化12次后，将上述上清过200目滤网，4°，800bpm，8min, 6ml 20%小牛血清(GIBCO)的DMEM高糖培养基重悬，接种于培养瓶中，1.5h差速贴壁，种于6孔板中。
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消化的温度应该是37°，不是冰上。

老师您好：我最近在心肌细胞原代培养，用的是0.25的胰酶消化3到5分钟，共消化三次，然后差速贴壁，每隔一个小时贴一次，用的培养液是高糖DMEM+10%的FBS；a-MEM+10%KSR，现在用高糖DMEM+10%的FBS养的养了5天，没有细胞，用a-MEM+10%KSR养的有不同形态的细胞，都看不到搏动，附上照片，请老师帮忙看看是不是心肌细胞。

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我们一般是用DMEM+10%FBS培养心肌细胞，没有用过a-MEM+10%KSR，在培养第2天时观察的心肌细胞形状和上图较为接近，这段时间有时部分细胞会有跳动了，一般第三天基本大部分细胞都有不错的跳动了，但若要确定是心肌细胞的话，估计还需要在显微镜下观察是否跳动，若有跳动，那么肯定是心肌细胞了，单从形状判断是不够准确的，一般在第三天后SD乳鼠的心肌细胞就会连为一片了，长的非常大，细胞较密时是分不清楚心肌细胞形状的。
另外，0.25的胰酶消化3到5分钟，共消化三次，我最一开始也是通过提高酶浓度，减少消化时间消化细胞的，但发现这种方式获得的细胞可能状态不是很稳定，有时会很好，有时会很差，实验次与次之间的差异性较大；用高糖DMEM+10%的FBS养的养了5天，没有细胞，可能是消化获得的细胞量较少或者是接种的细胞已经死亡了。
建议仅供参考，自己多琢磨几次就会好很多的，原代细胞培养受个人的操作影响还是很大的，所以需要尽量减少人为的影响，使每次实验细胞的状态都较为一致，这样可能会获得更合理的结果。

消化的温度应该是37°，不是冰上。

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恩，是的，我是在37°水浴消化的，可就是心肌细胞不搏动，有搏动的话，频率也是很低啊！不知道为什么，急死了！

恩，是的，我是在37°水浴消化的，可就是心肌细胞不搏动，有搏动的话，频率也是很低啊！不知道为什么，急死了！

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你有没有加BRDU呢，抑制成纤维细胞生长