小中大我是用的百分之0.08的胰酶,上次写错了。今天上午做了四只2天得SD乳鼠,取心脏大约2/3第一次加胰酶约2.5ml。然后消化效果仍然不好。请问是你所说的每次消化8分钟都加胰酶3ml么?还是第一次加三毫升,以后每次按照消化的量再加。我还要养心肌纤维细胞,所以上清液每次都保留,然后用血清中和,等最后一起离心,再差速贴壁。谢谢您的耐心指导。
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这位战友您好,回复比较晚,抱歉!
4只2d的SD乳鼠,心脏2/3左右,胰酶量可以适当的增加一些,一方面2d的SD乳鼠心脏可能会比24hr之内的大一些,个人觉得2-4mL都是可以的,原来摸索条件时一般用3只的,加入有2-3mL的酶液(SD乳鼠,24hr内新生);但我有一个不太明白的地方,就是您所说的消化效果不好,是怎么得出结论的,是消化液在显微镜下观察,还是细胞跳不起来,然后感觉是消化结果不好导致的?其实我消化时并不是每一次的胰酶量都一致的,开始8次大约多一些,到后面4次时,一般缩减为原来的一半酶液量左右。
原代细胞培养目前我们使用的方法可能更多的需要依赖个人的操作(在有能够做出较好结果的客观条件前提下),如果个人操作不好,那么细胞状态大都不会好,或者是不稳定(次与次差异性较大),所以在实验过程中,可能需要多留心,多注意,多体会,认真的思考一些,哪些地方需要轻柔,哪些地方需要注意无菌(我们一般多用于加药,所以是无抗生素的),哪些地方需要慢一些,自己感悟出来的可能比别人说的会感受和体会更深也可能更有用,这就可能在更大程度上会使我们的结果会更好一些,更稳定一些!