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标题:[未解决]关于HSA的ESI-TOF

  [未解决]本主题悬赏 可用分 10  
chemprince[使用道具]
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发表于 2009-1-14 23:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于HSA的ESI-TOF

不知道群组里有没有做蛋白质-小分子非共价复合物的TOF表征，我选用的是HSA，测定HSA时测到的全是denature的信号，没有nature结构的信号。全是带高电荷的，希望高手能指点。
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  • miracle   2009-1-16 11:09  可用分  +1   已有热心网友解答，请及时回应。 ...
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longcz[使用道具]
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发表于 2009-1-16 11:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在在做这方面工作
你用的是什么buffer?
一般需要用中性溶液，不能加有机溶剂和酸
一般推荐按使用250mM的醋酸氨
这个和仪器也有关系，有的Q-TOF由于Q1真空度太高，蛋白复合物在这里就分解了
你把你的试验条件写具体点吧
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  • miracle   2009-1-16 11:09  专家分  +3   十分感谢您的帮助
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发表于 2009-1-16 14:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢robertcams提供的解答

QUOTE:
“对于用ESI源进行蛋白质分析，一般都是用正电荷，因为蛋白里边的KR比较多，而且也都是带多个电荷的，最后形成层正态分布的一族峰，用软件将分子量算出来就行了，利用液质联用质谱做大分子一般都这样的（包括做蛋白复合物，蛋白相互作用及蛋白翻译后修饰研究等）。”

[ 本帖最后由 miracle 于 2009-1-16 14:30 编辑 ]
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发表于 2009-1-16 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
观察native-like 的蛋白质复合体是需要较大的耐心，并且要注意优化所使用的buffer，仪器离子源参数和离子传输过程中的参数，在该条件下离子化效率较低.
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  • miracle   2009-1-16 18:13  专家分  +2   谢谢您，欢迎您常来antpedia.com
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chemprince[使用道具]
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发表于 2009-1-17 12:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #2 longcz 的帖子

我用的是NH4AC的buffer，浓度从10mM、20mM都试过.现在还只是测定蛋白质，蛋白质在NH4AC（接近中性）环境中如果保持天然状态，带电荷数应该是+15-+19，但我得到的信号都是带几十个电荷的，折叠打开，暴露碱性位点，导致最后去卷积的质量分布很宽，根本很难判断复合物的峰。
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dumiao123[使用道具]
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发表于 2010-6-25 15:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可能你离子化过程中导致了HSA 的变性吧,建议你优化离子化条件
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  • miracle   2010-6-25 15:47  可用分  +3   感谢您的帮助解答！周末愉快！ ...
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