小中大我现在觉得不是机器的问题。我已经与ABI的工程师联系了，他说下周来帮我看看。在此期间，我用我们实验室的另一台机器Roch的Lightcycle又做了两次，结果也未出现荧光。是不是其他的又问题呢？我的试验是从接手探针和引物开始的，设计是别人做的。产物为202bp，与此有关吗？好像最优在60～150bp吧。我把我的引物和探针序列写上，您帮我看看,我是不是需要重新设计合成。多谢了。
上游：gga ccc aaa gaa ccc tat c 58
下游：tgc caa tat ctc tac atg c 54
探针：tca gcc gga tgt ccc tca ct 64
后面的数字为Tm值，计算公式为2×（a+t)+4×（C+G)
我的反应条件：94c 10min
94c 30sec
50c 30sec
60c 45sec
我实在是想不通，我现在无法解释以前有几次出结果是怎么回事了，太奇怪了，本来应该是重复性和稳定性的问题，现在成了有和无的问题。我用的酶是Tfl，与此有关吗。
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不知你的问题解决没有？
产物202应该没有问题，我有同事做过200多的，完全没有问题。引物、探针看着也没有问题。
一点建议，TAQMAN的program多用两步法，所以试试94c 10min, 94c15s, 60c左右60s （这步我们大都用62c）。
