PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】引物间形成二聚体怎么办？

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标题:【求助】引物间形成二聚体怎么办？

JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
整个操作应在冰上进行
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
适当提高退火温度并调整体系中的Mg2+浓度，结合热启动，通常可以有效减少引物二聚体的量。当然，你同时也可以减少引物的量，也会有一定的帮助。
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milkdog[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有一种特殊的引物方案可以最大限度地减少引物二聚体。
此方法是在设计引物时，在上下游引物的5'端加上序列一样的寡核苷酸尾巴，使得PCR进行到第三个循环时引物二聚体产物会自身退火形成发卡结构而阻碍继续扩增。具体的文献不在手边，有空再替您找找^_^

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这不是跟抑制性PCR一个道理吗？
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在做的时侯也遇到同样的问题,最后我提高退火温度,同时减少引物的用量就可以将条带扩增出来了,但是要注意扩增结果,我阔出的结果不是很亮,最后优化Mg2+,酶,多家一些模板就可以了
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am10[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我一直在用hotstar，感觉不错。

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你能具体讲解一下什么是热启动，如何操作吗？
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remonte[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
热启动吗？好像有些酶要在９４度６－10min才能达到最佳酶活，所以在扩增前，先将体系在９４度处理一下
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
QIAGEN 的hotstar 热启动是95度15分。就是在你的PCR程序上在循环前加上热启动步骤。
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youyou99[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

提高退火温度
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S6044[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我以前做热启动是这样做的，1.将样品加好后，放于冰上；2.启动PCR仪，待温度上升至70-85度时，迅速将样品放于PCR仪中进行反应。我们也有人是这样做的：先将样品加好（除酶外），然后把样品放于PCR仪中反应，待温度为94度时，再加入酶于样品中，然后按程序进行反应即可。
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yizhi[使用道具]
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发表于 2015-6-3 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

考虑一下体系，包括你的引物浓度，dNTP浓度，DNA浓度，Mg++浓度，还有你的Taq酶，因为你问题的确很麻烦，必须好好优化体系，慢慢的一步一步来，不要怕麻烦，OK!
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