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标题:【求助】引物间形成二聚体怎么办？

toy[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想问问：我们实验室习惯是最后离心一下，把PCR管壁的组分都甩在一起混匀。
如果在冰上，怎么混呢？
具体这步，您是如何操作的？
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purrr[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有一个问题：引物二聚体会是很大的片断吗？
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有一个问题：引物二聚体会是很大的片断吗？

===============================================================================================================

相关疾病：
先天性卵巢发育不全综合征46XX性发育睾丸疾病

因为我们的引物一般是在４０个以下，很少在４０以上，我用过一个４５ＢＰ的一个４６ＢＰ的引物．ＰＣＲ　如果发现引物二聚体，一般都是跑到最前头的那个弥散的条带，大约在１００－２００ＢＰ的区间里吧！！
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cj_mondy[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
测序前的纯化没有用么?

===========================

测序前的纯化当然有用。
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xue258[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想问问那位有OLIGO 6 的注册号，我想看看我设计的引物是否会形成二聚体 或者 发夹结构，是不是用OLIGO 6 来分析？
怎么分析？ 现在试验停住了，以前没有设计过。
向各位求助！！
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langlang[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以用GENETOOL工具，可以结合原序列的情况和引物的情况，给予预测
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再问：因为没有操作过热启动
1）是不是用的酶是特殊的，一般的Taq酶不可以，而要用HOTSTAR？
2）前面一个朋友提到的booster PCR是什么？请指点
多谢拉
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zhy平平[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zzzz 于 2015-6-3 16:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
再问：因为没有操作过热启动
1）是不是用的酶是特殊的，一般的Taq酶不可以，而要用HOTSTAR？
2）前面一个朋友提到的booster PCR是什么？请指点
多谢拉

热启动法,一般的酶也可以.只是一种增加特异性的方法,对酶没什么特殊的要求.
booster PCR,未见中文解释.!Stupid
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zzzz[使用道具]
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发表于 2015-6-3 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也碰到过，我是把退火温度降低，同时降低引物/模板比，这样做出来的
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