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在定量 PCR实验过程中,经常可以使用熔解曲线来进一步分析反应产物的特性。一般是在整个反应结束后,加设一段升温 降温程序:
以SYBR GREEN I 染料为例,这种非特异性结合 dsDNA 的染料,也可能和反应中的引物二聚体非特异性结合,而释放荧光信号,会导致仪器检测的信号不仅仅是目的基因的,所以需要在反应结束后设定一个升温过程,然后慢慢把温度降下来,因为不同DNA片段的解链温度不同,这时若PCR产物纯,则只会出现一个荧光峰,因为只有一个温度值,若有杂质,则会出现其他峰值,这是一个特异性检测方法。
另外,杂交探针试剂也可以用熔解曲线分析,作为 GENO TYPING 的一个方法
最近,有一种新技术 HRM 高分辨率熔解曲线,使用高饱和荧光染料 应用于 SNP分析,比如 RESO LIGHT 染料