液相色谱

　　反冲是没有什么问题的。

　　实际上HPLC色谱柱的填装压力比最大使用压力高很多(通常会高2倍)。如果装柱时使用了恰当的匀浆剂，并且分配一定的时间使柱床稳定，一支填装良好的色谱柱是完全可以双向使用的。需要反向使用色谱柱的情况包括：柱转换时的反冲、柱头被强保留物质吸附污染的色谱柱清洗(反冲的冲洗路径更短更合理)、冲洗残留在筛板上的颗粒物以降低柱压或防止柱压升高。

　　反向使用色谱柱有一个例外，就是生产商在色谱柱的进样端使用了孔径更大筛板的情况， 反向使用可能会将填料从柱床冲出。色谱柱在工厂填装时，出口端的筛板孔径必须比色谱柱中最小颗粒的粒径还要小。譬如，色谱填料平均粒径是5μm，粒径分布范围是3–7 μm, 出口端筛板孔径必须小于3μm ，使填料没有可能从柱床跑到色谱柱筛板外面。大多数生产厂家选择的筛板孔径是2-μm。 至于某些厂家两端的柱筛板孔径不一样，一般是进样端大些，出样端小些。

　　进样端大的原因：色谱柱被污染都是进样端首先被污染，尤其是进样端的柱筛板被固体颗粒堵牢了，一个 0.5-μm的筛板会比一个 2-μm的筛板被堵得快，导致柱压极高，色谱柱就没有办法用下去了，如果进样端的柱筛板孔径越大，固体颗粒就越不容易堵在这里。通常色谱柱上就会标一个箭头表示只能在一个方向使用。

　　出样端的柱筛板孔径小些，原因是：怕填料流失。

　　但现在不一样了，绝大多数厂家都采用了对称的筛板。

　　至于现在为什么有人认为不能反冲，是因为色谱柱经过一段时间的使用，里面的填料已经得到了很好的平衡，越接近柱尾端填料相对越密实。一旦反冲或反接，填料的分布状态又会被打乱，会影响到分离。但是在实际试验过程中，分离常规物质时候影响并不是很大。

不是吧你……新柱子你要我拆开啊！……

问下你用的什么流动相反冲的啊？

色谱柱压力大了一般是色谱柱脏了将柱前垫片堵塞了，这时最好是将柱头打开将垫片取下在甲醇溶剂中超声清洗十几分钟再接到色谱柱上，若还是不行， 可将垫片放在硝酸中超声清洗后用水冲洗至中性在接到色谱柱上

我师兄反冲过一次，不过当时是犯了迷糊不小心装反了冲的，3ml/min，属于高速了吧，好像也没什么感觉

反冲不能用高流速的，否则柱中填料会松动。
有条件的话，最好了解下色谱柱填装工艺。

可不可以反冲得看你的柱子两头的孔径是否一致，若不一致肯定不行。
若一致，一般来说，低流速反冲是没有任何问题的。因为柱子在制备的时候，是在40MPa左右（也可能更高）条件下进行填充的，1.0ml/min的流速的柱压顶多十几MPa，怎么可能对柱床造成明显的影响呢？
有人说：“反冲可能使键合相碳链一边倒，与原来的方向相反，会影响柱子的分离效果。”  众所周知，只有碳链在完全自由舒展的条件下，柱效是最好的，照上面的说法，反冲不刚好把碳链恢复到自由舒展的状态，这样不更好吗？ 其实，实验早已证明：在至少5%的有机相中，碳链是可以完全自由舒展的。
再者，强保留物质基本都是保留在柱子头部，因此反冲可以事半功倍。正冲则可能污染整个柱子。