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标题:[未解决]NADH的色谱检测

  [未解决]本主题悬赏 可用分 20  
090820040[使用道具]
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NADH的色谱检测

我正在做胞内NAD、NADH的检测,目前用HPLC检测,我用的流动相是
(乙腈:含有10mM四丁基溴化铵的300mM 磷酸钠缓冲液ph7.0=4:96),色谱柱:C18反相柱。
NADH标准品用的是NADH二钠盐(买不到NADH),
检测样品中的NAD的峰比较明显,但NADH的峰十分微弱,请问各位高手:

第一,是否NADH二钠盐与NADH出峰时间不一致,还是流动相不适合导致NADH出峰不明显?

第二,NAD的峰与其他杂质峰分得不是很开,而NADH的分离度较好。样品的ph值约为6.5。

所以请问:有什么办法可以使峰的分离度更好些?

谢谢!
NADH结构式:

[ 本帖最后由 090820040 于 2011-6-27 15:17 编辑 ]
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  • miracle   2011-6-20 16:46  可用分  +2   鼓励坛友发起话题交流!欢迎常来! ...
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aa1380[使用道具]
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呵呵,分的不开是很常见的,需要优化流动相。

供试品也可考虑纯化一下。
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hplcangel[使用道具]
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楼主要测得化学物质名称最好别用这种字母,看不懂。峰十分微弱的原因,1,样品浓度太低,2,在你这个波长下这种物质吸收不明显。3,所选的分离方法不合适。
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entd_jps[使用道具]
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也可以换根长柱子,或者换个别的C18柱子试试
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mj231251[使用道具]
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样品对pH敏感吗,调节pH试试?还可以换其他的离子对试剂试一试。
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unknow[使用道具]
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回复 #1 090820040 的帖子

你用的是反相离子对色谱法,二钠盐和NADH的出峰肯定是一致的。
可以通过增加水相的比例增强保留来增大分离度。
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090820040[使用道具]
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回复 #6 unknow 的帖子

谢谢!水相的比例已经很高了,再高不太好吧,磷酸缓冲盐的浓度也已经很高了
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回复 #5 mj231251 的帖子

谢谢!换甲醇好像也不行。
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回复 #2 aa1380 的帖子

谢谢! 目前还未找到纯化样品的方法
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回复 #4 entd_jps 的帖子

谢谢! 我试试看
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