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标题:【讨论帖】种好你的96孔板

mimili_901[使用道具]
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我有一个问题想请教LZ啊,你说的这种方法种96孔板很好的话,那24孔板和6孔板之类的大一些的呢?怎么样做才能做到较均一呢!这种方法适合吗?O(∩_∩)O谢谢
24孔板和6孔板我也种过,不过对细胞均匀要求不是太高,也就没怎么要求,发现种的时候细胞总是中间堆积,可能是孔比较大,孔内的液体很容易晃动,即使种的时候均匀了,取放板子的时候也难免会晃动板子,大家如果有这方面经验的话拿出来分享一下啊!
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mimili_901[使用道具]
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新方法要不要再孔里先加些培养基?
不用加培养基,只用把稀释好的细胞直接加进96孔板就可以了。
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mimili_901[使用道具]
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还有一个问题就是LZ说的这种新方法用排枪做还行啊?还是需要一个一个孔的加啊!谢谢
排枪没有试过,我用的就是普通的抢,你可以试试!
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NBA[使用道具]
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24孔板和6孔板我也种过,不过对细胞均匀要求不是太高,也就没怎么要求,发现种的时候细胞总是中间堆积,可能是孔比较大,孔内的液体很容易晃动,即使种的时候均匀了,取放板子的时候也难免会晃动板子,大家如果有这方面经验的话拿出来分享一下啊!

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关于这个问题上面回帖中有个站友写的:种六孔板要在内测边缘缓慢加入,加完后20分钟内尽量避免移动,如果细胞不均匀的话可水平震动培养液是细胞重新分散,再静置20分钟,后移入培养箱。
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ldh[使用道具]
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是呀,请问LZ,如何避免取放板子时,细胞的晃动呢,如果如某战友提到加完后,放置20分钟,再移动,会不会影响细胞正常生长,我个人的小经验是从侧壁缓慢匀速加入细胞,只要细胞悬浮分散的好,基本很少出现扎堆现象。移动板子对细胞的影响比较小(正常的取放,当然了,动作要轻柔)
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veiwu[使用道具]
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谢谢,先学习了。到用到96孔板时再应用下。谢谢楼主了!!!
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冰儿0109[使用道具]
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还是用力摇几下比较好。是一侧加入的,但是一般是50ul,不晃的话培养基就会不均匀,等过一段时间才能盖住底部。最关键还是之前的细胞要均匀,这样一般加进去都是比较均匀了。
另外,24和6孔板,可以前后左右晃,晃得频率要一致,就是试下晃几下,左右晃几下,交替着并且频率一致。还有一种方法可以试一下,就是可以平着画8字。效果都不错。
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ns5fan[使用道具]
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做实验将近一年,从丁香园上学到了很多东西,感谢很多战友给予的帮助,现将我在实验过程中的一点儿小小的经验拿出来和大家分享,希望对种96孔板子的战友有帮助。
刚开始用96孔板种细胞时细胞总是分布不均匀,第二天就会发现有些地方出现堆积性生长,而还有不少地方细胞则很稀疏,细胞密集的地方因细胞与细胞之间的接触抑制影响细胞的生长,这样就很难评价干预因素对细胞的作用,因此将96孔板种均匀也是进行后续实验的前提,现将我以前用的老办法和最后用的新方法比较一下,以让大家看看各自优缺。
1、老方法:这个是从丁香园上学的,就是种过板子后,用手将96孔板平拿起,左右晃动几下,然后再前后晃动几下,不过这种方法5个复孔中总有2-3个孔中细胞分布不均匀,多数情况下是孔的中间出现成堆分布,为此苦恼了一阵子。还又一次见一师姐将种好的板子放在摇床上摇了几分钟,结果更惨了,细胞全部跑到中间了。
2、新方法:这种方法简直是太好了,种的很均匀。先用抢将吹打均匀的细胞吸起来,让后将枪头紧贴着孔的一侧壁(注意枪头的尖不要接触孔底),然后将枪头中的细胞缓缓的打下去,种好之后千万不要摇晃板子,直接放到显微镜下看就可以了,此方法可以说是100%的有效吧。
希望对大家有帮助。
......

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嗯,94传说中的形成涡流,让细胞自然沉降。
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11_hjx[使用道具]
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原来是这样啊,以前总种不匀,谢谢了!
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bring[使用道具]
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最近的确遇到铺板不均匀的问题。下次要试试这个方法了。多谢了Smile
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