细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » 【分享帖】关于细胞培养中的污染

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【分享帖】关于细胞培养中的污染

xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
21
 

我的细胞污染探索
某天打开孵箱,看到我的L1210的培养瓶培养液又是黄黄的,觉得很不错,今天又可以传代了,可是在镜下一看,细胞虽然明显增加了,但并没有象以前那样长满,而且更让我心惊的是怎么出现了许多黑色的小点,杆状,而且好像在动来动去,翻转,旋转,在细胞很多的地方小点就少,而在细胞较少的地方小点就多,细胞的活力也没有以前好了,第一反应细菌污染,请实验室老师过来看,说不是细菌污染,这个点要比细菌的小黑点大的多,也好象不是霉菌,没有菌丝,没有常见的团壮的生长,肯定不对劲,但到底是什么,说不上来。最后,决定换液、洗涤、离心,换瓶,操作结束后镜下看黑点几乎看不到了,有点放下心来。
隔天后去看,培养液还和上面的一样,但镜下,那种东西又出来了,在细胞少的地方,几乎呈现出粗砂粒样,我欲哭无泪,知道可能不行了,郁闷的换液后,回家上网·搜,一个名词跳了出来:黑胶虫。黑色、杆状、运动、细胞不会很快死亡,这些描述简直惊人的一致,我确定了,我受到了黑胶虫的袭击。但黑胶虫是什么,由于网上说法不一,我决定探究一下。
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
22
 

这是我的探究过程:首先,培养液略黄,稍有浑浊,镜下观察,细胞还没有死,但是已经不长了,那种东西已经是铺天盖地了,满眼望去,尽是粗砂粒样,细胞好像成了一个个汪洋中的小岛。
细胞涂片,送到化验室,革兰氏染色,不久电话回报怀疑--真菌。第一反应不可能,亲自去了化验室,看到了片上一个个瓜子样的小点,染色呈黑色。看我还有些怀疑,化验室的同事又作了滴片,镜下暗视野40倍可见一个个亮白色芝麻样的东西在游来游去,再次涂片染色仍和以前一样,并且可以见到芽孢样的形状,他们确定无疑是真菌,但不是常见的念珠军、霉菌,具体是什么,也说不上来。由于已经盖棺定论,计划的HE染色、支原体没有进行。
已经将污染的细胞扔掉了。休整几天。
附照片。
1、这是未污染时的细胞
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
23
 

1、这是未污染时的细胞


查看积分策略说明
附件
2015-6-9 21:31
36598482.snap.jpg (57.88 KB)
 
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
24
 

2、这是污染后的


查看积分策略说明
附件
2015-6-9 21:31
47901057.snap.jpg (65.63 KB)
 
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
25
 

另一张


查看积分策略说明
附件
2015-6-9 21:32
64947358.snap.jpg (64.22 KB)
 
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
26
 

染色后


查看积分策略说明
附件
2015-6-9 21:32
35835299.snap.jpg (50.98 KB)
 
顶部
xevin[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76455
精华 0
积分 799
帖子 1176
信誉分 101
可用分 6807
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
27
 

滴片:视野中白色的亮点就是感染物。另外,上染色图红染的是细胞,其周深色点壮的就是污染物
顶部
vcve[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76131
精华 0
积分 743
帖子 1043
信誉分 101
可用分 6126
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
28
 

真是太感谢了,上面的照片怎么和我的情况一模一样,我本以为是培养瓶不干净,杂质太多造成的。现在细胞还在快速生长,传代后培养液第二天就变黄了,那些小点点很多,还是贴壁的、不动,有时和细胞很难区分。恐怕我的情况也是污染了。。。
顶部
youreyes[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 107975
精华 1
积分 461
帖子 578
信誉分 102
可用分 3691
专家分 10
阅读权限 255
注册 2013-4-27
状态 离线
29
 

我的细胞也有这种情况, 不过,没有楼上的图片那么严重,小黑点还比较少,我用PBS洗了3遍 在换上新鲜的培养液小黑点少了很多,只是个别的.我开始也怀疑是细菌污染 ,因为太像杆菌了,后来单独培养这种小黑点,不浑浊 ,应该不是细菌.但我觉得也不是真菌.最有可能就是传说中的黑胶虫,但这是一种什么生物啊?其实对细胞的影响还是蛮大的
顶部
白白的[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74061
精华 0
积分 277
帖子 274
信誉分 100
可用分 2136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-4
状态 离线
30
 

我的肿瘤细胞在用小牛血清培养的过程中,
有不少的黑点,但是培养液颜色细胞等感觉都正常,
长势一般(新复苏的,且更换培养基了),总体还是慢吧。
然后为了处理黑点,我过滤了血清并且将细胞离心下来转移至一次性培养瓶中,黑点减少,但是细胞长势依旧。
然后另外一瓶(重复使用玻璃培养瓶),我更换了胎牛血清,
当天发现里面有大量的黑色杆状的类似黑胶虫问题,
但是第二天虽然现在仍有一些黑点,
细胞长势还不错!
所以我认为黑胶虫问题,很大程度是和血清质量有关的,
至于培养瓶等还是小问题,
应该不是污染。
顶部