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标题:【分享帖】关于细胞培养中的污染

婴儿脸[使用道具]
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我培养基里都加了双抗,刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好,但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着,瓶底还是有贴壁的细胞,细胞培养基混浊,开始以为是细胞长得太多,导致接触抑制死亡,但是倒掉培养基,用PBS洗干净,把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后,第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少,每天给他换液,到了第三天左右,细胞数目不多,但也出现了上述的情况(很多碎片和团状物飘着),不知大家有没有遇到这种情况,帮忙分析分析。我也有同样问题

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我也有同样问题,是不是细胞污染了?
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子衿青青[使用道具]
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我培养基里都加了双抗,刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好,但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着,瓶底还是有贴壁的细胞,细胞培养基混浊,开始以为是细胞长得太多,导致接触抑制死亡,但是倒掉培养基,用PBS洗干净,把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后,第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少,每天给他换液,到了第三天左右,细胞数目不多,但也出现了上述的情况(很多碎片和团状物飘着),不知大家有没有遇到这种情况,帮忙分析分析。谢谢!(我养的都是肿瘤细胞)

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我也出现这种状况,有哪位大虾能解答一下,已经养了两个月细胞的,还是没养好,急啊!!我养的是肾小管上皮细胞
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utt0989[使用道具]
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想问问楼主,我的细胞在培养瓶里养四五天还是好的,但铺到六孔板里,长满后用无血清培液就会出现一团团黑黑的浮着,细胞变得模糊了,这种情况像是支原体污染吗,请指教啊,不胜感激
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am10[使用道具]
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相关疾病:
我的细胞中,突然出现黑色的圆点,应该不是细菌感染,因为细胞还在贴壁生长,但是长得不太好。那个黑点点好像还是贴壁的。各位大虾,这是什么情况,帮忙分析分析
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lagua123[使用道具]
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我的培养瓶里一天后就出现了絮状沉淀 贴壁的黑点和黑色细丝状旋转运动的东西都有 培养基也变黄了 我真是中了个大奖 齐了
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tie8[使用道具]
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相关疾病:
【黑胶虫】
“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物,“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。“黑胶虫”可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞并没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候,细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断,尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。本培养基,对“黑胶虫”具有很好的抑制作用。通过使用此种特殊培养基,“黑胶虫”的污染可以得到有效的控制,为防止污染和抢救有价值的细胞提供了强有力的技术手段,是节约人力物力、减少不必要的经费支出和保证科研工作的顺利进行的重要手段。
【支原体】
无论生物医学研究还是生物活性制剂及药物的开发,细胞培养成为不可或缺的重要工具之一。真核细胞(eukaryotic cell)培养面对的最大问题是各种潜在的微生物污染,包括真菌(fungi)、酵 母 菌(yeasts)和 细 菌(bacteria)等。细 菌 感 染 中 尤 以 支 原体污染(mycoplasma)最为严重,不同于其它细菌感染,支原体感染不易发现,需要特殊的检测手段才能确定,并且支原体感染对常见抗生素不敏感,总体细胞培养支原体感染率大约在30%。消除支原体污染的最佳方式是抛弃培养的细胞,对接触细胞的所有器具进行高压灭菌,重新复苏细胞。但较多情况下,被污染的细胞不可替代,因此使用特效抗生素消除支原体污染非常重要。“HBK”开发的出一系列支原体检测和消除试剂,其中MycoER由两种抗生素组成,分别属于Macrolide和Tetracycline类抗生素,结合我们推出的最佳细胞处理程序,消除支原体有效率在85%以上,细胞产生抗性的比例不超过15%。
【细菌、真菌污染污染】
细菌污染:细菌是一种原核细胞微生物,其大小以微米(μm)计。常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等,革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。一旦发生细菌污染较易发现,多数情况下培养基短期内颜色变黄,表明有大量酸性物质产生,出现明显混浊现象;有些细菌污染在静置的培养液中十分不明显,稍加振荡后细菌和裂解的细胞产生的碎片会浮起。
真菌污染:真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种,尤其在阴雨季节进行细胞培养更易污染。污染培养细胞的多位烟曲菌、黑曲霉、毛霉菌、孢子菌、白色株菌、酵母菌等。霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见,较易被发现,短期内培养液多不浑浊,显微镜下可见于细胞之间纵横交错穿行的丝、管、及树枝状菌丝,并悬浮漂荡在培养液中。
虽然只是几份说明,希望解决各位实际问题。对国产培养基、血清、试剂方面原和大家交流经验心德。
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另一张

......

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这点不黑啊。之前也遇到过,感觉就是真菌。有些连在一起呈链状,应该是常见的真菌,和黑焦虫差远啦。没见识过黑焦虫的真面目呢!
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newway[使用道具]
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我的细胞中,突然出现黑色的圆点,应该不是细菌感染,因为细胞还在贴壁生长,但是长得不太好。那个黑点点好像还是贴壁的。各位大虾,这是什么情况,帮忙分析分析

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我也遇到过,用环丙沙星能清除,可能是支原体,不管是不是支原体,四环素类能解决,而且不复发
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BUK[使用道具]
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冻存细胞MDA-MB 231培养第二天,
怀疑有污染了,感觉细胞形态不是很好,另外有一种比较大、细胞质很淡的细胞生长,是不是污染了啊。。。?
谢谢大家赐教。


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