液相色谱

大家好。

采用内标法测量物质A，内标物为B。

已单独配置好500 ug/mL的A和B，想稀释成10  ug/mL 的A和B，然后混合，用HPLC测出峰面积后，根据进样质量和峰面积的关系求出F. A和B的溶解性均大于500 ug/mL。

请问 哪种测试方法正确
1)将500 ug/mL 的A和B 分别稀释成10  ug/mL,  再各取A和B 1mL混合，过滤，进行测试（这时A和B的进样质量比为1：1）
2)将500 ug/mL 的A和B 分别稀释成10  ug/mL，过滤，再各取A和B的滤液 1mL混合，进行测试 （这时A和B的进样质量比为1：1）
3) 将500 ug/mL 的A和B 分别过滤，各取1mL混合，将滤液再稀释到10  ug/mL，进行测试（这时A和B的进样质量比为1：1）

在测量未知样品时，假设未知样为含有A的水溶液，再采取以上一种方法进行求解F的测试后，内标物应该怎样加到待测样品中呢？是取相同体积的未知样和内标物(10  ug/mL) 混合后进行过滤，还是先将未知样过滤后，再混合同体积的内标物(10  ug/mL)和样品进行测试呢？

多谢了~~

1）错误，这样配出来的是5ug/ml的样品
2）错误，原因同上
3）配法正确，但操作有问题，应该是：取50ml容量瓶，分别准确移取500 ug/mL 的A和B1mL，溶剂定容至刻度，摇匀，过滤，进样。

先配样品，进样前过滤，过滤的目的是保护液相系统，与配置无关。

谢谢你的建议。
但不是很明白 “先配样品，进样前过滤  ” 时，该怎么加入内标物呢？内标物假如量最终在待测液中的浓度也必须是10ug/mL吗？

[ 本帖最后由 cyp256 于 2011-7-7 12:09 编辑 ]

应该要在过滤前定容一定体积加入内标物吧。

之前我用过的是先混合后过滤，先过滤后混合没有试过，试试就知道了

1、如果是普通的液相，不是什么样品都要过滤的；
2、第3法最好；
3、如果样品需要过滤，就先过滤，内标就没有必要过滤了。

内标物的浓度必须在标品和样品中是一致的。标品溶液中内标的浓度是10，样品溶液中内标的浓度也得是10。
内标有什么难加的，你要配多浓的，在配制标品溶液或样品溶液前，选好配这些溶液的容量瓶，加入折算体积的标品或样品母液，再加入折算体积的内标母液就行了啊，我实在不明白楼主还有什么不明白的！

比如配含有10ug/ml的内标B 的10  ug/mL 的标品A：取50ml容量瓶，分别准确移取500 ug/mL 的A和500 ug/mL的B各1mL，溶剂定容至刻度，摇匀，就配成了！
比如配含有10ug/ml的内标B 的样品A：取50ml容量瓶，分别准确移取500 ug/mL 的样品溶液A和500 ug/mL的B各1mL，溶剂定容至刻度，摇匀，就配成了！

把配好的溶液过滤一下进样就可以了！

明白了你说的配制标品+内标10  ug/mL的方法。

我的待测液是含有未知浓度的A的约2mL 水溶液，这时我可以用40uL的500 ug/mL 的内标液和1.96mL的未知液混合成2mL后过滤进样嘛？这时内标是10  ug/mL，未知样所测得的浓度比原液小，但是通过HPLC测量后，也可以换算求出原液中未知样的质量。
这种方法可行吗？

多谢了。。我是刚用这个的菜鸟，多多指教啦！！

可以，但是为了测量准确，未知样的测量峰面积最好接近标准品的峰面积，如果小太多，比如小50%以下，最好将标准品也稀释到类似的水平再进一针作为对照，当然内标浓度是不变的。

　　我们是这样做的：

　　为了看单个的对照品的峰位置，先配各自的对照品溶液。比如：A液和B液。

　　既然要把一个物质作内标，那么就得完全保证在操作过程中，内标与你所测的物质完全是在同一条件下进行。

　　所以，你的做法是不对的。即不是先混合二者的液体再过滤，也不是先单独把二者的溶液过滤再混合。

　　而是：称取A和B后置于同一容量瓶，配制混合对照品，再过滤，进样。