液质联用

建议采用不同模式不同色谱柱分离来测定纯度

质谱的分离是根据不同的分子量来分离的，遇到同分异构体就很难确定纯度。

1、原理是：含量比例等于峰面积的比例.

2、需要测定：相关化合物对应的峰的面积。那些数据?

3、获得的数据处理：单个峰的面积除以总的峰面积，既是含量或者纯度。

对于对照品的纯度，首先要有一个较为客观的认知：所测得的纯度系数绝非真实值，工作中也没必要获取真实值，只有所得数据的误差可满足工作需要即可。否则就会陷入“画地为牢、墨守成规”的思维定式，对该纯度值“格物致知”。

洞悉了以上道理后，就会明白：对照品纯度系数的测定绝不无必要采用HPLC-MS法，普通的容量分析法与液相法足以。

分析人员爱穿牛角尖，这便是一个典型例子，呵呵……

上海药检所 谢老师回复

关于标准品纯度检定的问题记得以前药审中心发过一个技术指导要求，并没有规定必须用什么样的检测器。其实标准品纯度检定是一个数据综合问题，要结合核磁、质谱、紫外、红外以及色谱归一化的数据做综合性评判。
核磁至少6张谱，包括氢谱、碳谱、二维谱4张（包括哪4张记不太清了），各谱信号均有明确归属和解释。如果你的样品纯度低于90%的话，估计核磁上应该肯定有归属不了的信号。
质谱（必须是一级全扫描谱）各谱峰有明确解释并符合该化合物裂解规律。
紫外与红外数据应能佐证该化合物结构，没有明显的官能团差异。
最难办的是色谱归一化数据，不论用什么样的检测器，如非质量型的紫外、DAD、MS等及质量型的示差折光、ELSD等，都需要做的是10倍样品测定最大进样量（标准曲线最高点）并延长采样时间（至少达到目标化合物保留时间的3倍）考察归一化数据，然后再通过调整流动相将目标化合物保留时间延长3倍同样10倍最大进样量考察归一化数据。理论上还要再换两种色谱柱（或不同的色谱柱）和两种不同的检测器（不同类型的，最好包含一种质量型的）考察上面的数据。有时候还要附带上薄层色谱不同板子不同展开剂的数据，同样要考察检测最大量的与10倍最大量的。
以上数据都没问题，您就可以拍着胸脯大声喊出您的标准品纯度了。
至于如何用LC-MS测定标准品的纯度，您结合仪器特性，完成上面的数据综合评定一下就好了。当然如果能提供更多的信息与数据，那就更加完美了。

最简单的方法HPLC-DAD和LC-MS都运用进行检测，用已知浓度的标准品作为样品，在两种方法下进行定量，看哪种方法更准确，再用该方法对你分离的样品进行定量。

医药企业在进行纯度确定的时候，一般都是用LC和核磁，而LC-MS不作为纯度定量的手段。

同意“21ty ” 的做法和观点。

做标准品样品，要有标准品做对照，只要测定结果和标准品一致，基本上就可以用了；最好四大光谱都测一下，提高准确率。

如果你是做标准品（世界上还没有这个标准品），那么要把各种仪器都要用上，把物理、化学和结构性质都要搞清楚。就如前面“shine”说的，熔沸点得测一下，看看沸城

这是一个关于标准品纯度验证的问题。
首先，需要明确标准品的纯度定值不是检测实验室或者检测人员开展的工作，必须是由获得相应资质、按照量值传递、能够溯源到上一级基准符合要求及程序开展。
至于LC-MS，其原理本身不具有定值、测定纯度的可能性，只用于定性测定。

质谱定量的基础是离子流强度和离子数目成正比，LC-MS法可以理解为将质谱仪作为色谱仪的检测器，其定量方法与色谱法相同。

若对某一组份进行定量测定，可以采用色谱分析法中的归一化法、外标法、内标法等不同方法进行。与色谱法定量不同的是，LC-MS除可以利用总离子流色谱图进行定量之外，还可以利用质量色谱图进行定量，这样可以最大限度的去除其它组份干扰。

为了提高检测灵敏度和减少其它组分的干扰，MS定量分析经常采用选择离子扫描方式。对于待测组分，可以选择一个或几个特征离子，而相邻组份不存在这些离子。这样得到的色谱图，待测组份就不存在干扰，同时有很高的灵敏度。用选择离子得到的色谱图进行定量分析，具体分析方法与质量色谱图类似。但其灵敏度比利用质量色谱图会高一些。

标准物质的标定，如果是对照品用质量平衡法，如果是标准品则与国际标准品进行比较。

质量平衡法：

一是结构确证：元素分析，核磁共振，质谱，红外，紫外等。

二是纯度验证：吸收系数，比旋度，熔点，热分析等。

在一和二通过的基础上，三是含量赋值：含量=100%-两种以上色谱的平均杂质%-水分%-炽灼残渣%。