液相色谱

你的A，B流动相都是缓冲液吗，那你的柱子是什么柱子，C18是不可以这样用的，损伤很大，基线漂移正常，但突然严重下降不正常，请给出柱子类型

同意大家的建议，基线下滑，有可能是平衡时间不够，多平衡一段时间，可以将控制面板清零反复几次，不妨可以试一试。

梯度洗脱的情况下出现基线漂移是很正常的现象，除非等度洗脱或者以足够缓慢的梯度进行洗脱，才有可能避免

曾经把磷酸盐缓冲液在冰箱放了两天又用的，基线跑低，后来重新配的流动相，就走平了。但是楼主的情况没有特别明白，能否把色谱条件都列上，更能看出问题所在

应该是平衡时间不够，曾经做过需要平衡6-7个小时的缓冲盐体系，未稳时基线也是一直下滑。

这种情况经常见于以下情况：（1）仪器未稳定好，主要包括检测器预热不够；柱温箱温度未平衡好；室温空调未稳定；
（2）起始流动相不干净，与有机流动相不平衡；（3）样品溶解液有高度不溶性污染成分；
不常见的情况有：（1）管路污染，流动池被污染被逐渐清洗干净；（2）紫外灯老化，寿命到期。
要逐项排查。

基线变化在梯度洗脱中很正常，每种溶剂的紫外吸收都不一样，在比例变化时，产生吸收的变化属于正常的现象

在用疏水色谱分离蛋白质时，通常流动相A液为3.0M 硫酸铵 + 50mM PBS, B液为50mM PBS，在梯度洗脱过程中经常会出现基线下滑的情况，有时还会有基线上升的现象。这主要是由于使用的硫酸铵中存在某些杂质，这些杂质存在本底紫外吸收，当A液从3.0M硫酸铵随梯度运行变为0时，常常会造成基线下滑。一般情况下，基线下滑对蛋白质分离影响不大。另外，有时检测器氘灯的的能量不足时，也可能引起基线下滑。

这很正常，我们知道，液相色谱主要用的检测器是紫外检测器，原理是被测物质具有紫外吸收，这样通过传感器对紫外光强度的变化产生感应，转换为电信号，加以连续记录，以信号强弱对时间作图，得到色谱图。而被测物质是通过流动相经过色谱柱，利用吸附／解吸附等分离原理将被测物与其他组份分开，然后载被测物到紫外检测器的检测池中，且一直处于流动状态，而流动相其实不是对紫外线完全没有吸收，所以会有本底吸收值，我们可以通过参比技术等消除，并保持稳定，形成一个基线，但前提是流动相的组分保持不变，如果组份发生变化，吸收值也受到影响，基线就会发生变化，也就会漂移，当然这种漂移是有方向的，也就是你看到的下滑或上飘，下滑或上飘取决于流动相组分变化时对紫外的吸收是变大还是变小。

1.检测波长越靠近末端吸收，基线漂移越严重。2.磷酸盐浓度越大，基线漂移也越严重。特别是在选用磷酸调节pH值之后更明显。3.如果使用串联泵发生基线漂移，可以换个并联泵试试。4.采用乙腈比选用甲醇的漂移严重。5.梯度设计欠合理性。6.进针之间的平衡不够充分，从而影响下一针出峰。7.被测物质的溶剂状态不合理（比如是否需要更换溶剂或调整被测物的处理方式）8.其它个别因素，包括流动相系统杂质干扰（但这是小概率事件，一般不会有这么大的影响）
以上所指的是基线单向漂移，若出现上下漂移，则首先考虑机械问题，仪器使用故障等。一般来说，梯度有基线漂移，属正常，只要不干扰分离和解析即可。