液相色谱

梯度洗脱随着有机相的变化经常会出现基线漂浮的问题，原因为流动相A和流动相B的本底吸收不一致所致；楼主的问题有多方面的原因，首先检测波长，波长越低，基线漂浮越明显；其次试剂的级别，应选用色谱纯试剂，包括水；最后应考虑盐的浓度，浓度越大对基线漂浮的影响越大；楼主流动相S中添加了硫酸铵，可考虑浓度高低可能对基线有影响，建议首先流动相A中不添加硫酸铵后考察基线，以此判断是否是硫酸铵的原因所致。
    梯度洗脱基线漂浮本身可能有多方面原因，楼主应逐一排除。

梯度洗脱时流动相必须一致，洗脱时要么改变PH，要么改变离子强度，因此A液必须是低离子浓度（或低PH值）的磷酸缓冲液，B液必须是高离子浓度（或高PH值）的磷酸缓冲液，这样就不会出现基线下滑现象。

（1）变化一下流动相的摩尔浓度，看看是否过高引起，建议在10 ~ 50 mmol/L。。。（2）奇怪流动相为何用两个缓冲体系，建议用一个。。。

这个要具体问题具体分析，引起梯度下滑的原因要从多方面考虑：
1、流动相是否平衡好？尤其是加了缓冲盐的流动相
2、梯度变化是否过大？加了缓冲盐的流动相如果梯度变化过大，也是引起基线不稳的因素之一
3、选择的是什么类型的检测器？如果是示差检测器，流动相变化和色谱柱温度是否稳定的影响更大，如果是DAD的检测器，尤其在低紫外吸收波长，接近溶剂的末端吸收时，基线也很不容易平衡，另外，随着流动相中有机相的比例不断增大，也会引起基线下滑
解决方案参考：
1、把色谱柱重新干净后，重新平衡色谱柱
2、把梯度变化变小和平和
3、调整流动相的组成
4、改变紫外吸收波长

以上是个人见解

首先,先问一下用到什么检测器,如果用的是紫外检测器,有可能是流动相性质差异过大,梯度洗脱时紫外吸收差异较大造成的,另外,两种流动相都用到缓冲盐有误.一般是用一种缓冲盐,另一种用极性有机试剂,如甲醇,乙腈,异丙醇等(反相色谱柱).

建议：
1、试剂不纯，杂质过多。特别是A液，最好用色谱纯试剂或优级纯试剂，一定要用15Ω以上超纯水；
2、用同样梯度和流速反复洗脱空柱（不要进样），观察基线是否漂移；
3、注意观察样品洗脱过程中压力是否稳定。仅供参考。

关于梯度洗脱基线下滑和抬高我都遇到过，只要大比例更改流动相时就会下滑很大（比如是50%甲醇直接换成100%甲醇的时候会出现，而当50%甲醇在10min慢慢变成100%时则要好很多）。我认为是由于两相溶剂自身的紫外吸收不同，当急速更换流动相时，后面的流动相与更换前的流动相本底紫外吸收差别很大，当后面的紫外在检测波长下吸收低于前面的流动相时，就出现下滑（类似出现倒峰）；反之，则会出现基线抬高现象，例如我在使用THF时，它的末端吸收在235nm，而乙腈在190nm，所以，当100%乙腈换成我的流动相（水：乙腈：THF-50:40:10）的时候，基线就会抬高出现一个平台。

后来我发现这还与色谱柱有关，色谱柱性能高的时候，不会出现这个情况或者情况要好一些，因为当流动相往前推进的时候，在性能高的色谱柱上是均匀前进的，所以是一个渐变的过程，不会出现流动相急变的情况。而性能不好的色谱柱，它会在色谱柱的某些部位残留有没有更换好的溶剂，平衡时间长一些才能全部置换出来，当这些溶剂出来的时候就会出现出现倒峰或基线抬高的现象。

当然还与溶剂的质量好坏有关，进口的甲醇就比国产的甲醇的溶剂峰要小很多，在1-2min出现的溶剂倒峰很小，有时候都没有，梯度洗脱的时候基线漂移也会小一些。

我觉得他这个问题，应该是磷酸盐缓冲液质量不合格（正常的磷酸缓冲液在大于210nm都是没有本底吸收的），并且他的检测波长估计还在很短的位置，这样硫酸铵在280nm都会干扰紫外吸收，在低波长估计影响更大。他用一个紫外吸收强的溶剂系统A换成一个紫外吸收弱的溶剂系统B就会出现倒峰，基线下滑。他没有说具体的情况也没有给出图谱，也只能推测。

我那时候用THF的时候就遇到这个问题，后来发现旧柱子平衡时间大于2小时就没事了，后来买了新的色谱柱也没有这个问题，所以也没有深究这个问题。

希望上述回答能解决问题。

1.首先要了解基线以及影响基线稳定的因素。检测器信号、柱子冲洗平衡与流动相的关系。

2.检查非梯度淋洗时，基线是否稳定，若不稳定，要冲洗柱子直至稳定，最好用纯有机溶剂如甲醇或乙腈等先冲洗，在用流动相平衡，若梯度分别用两种流动相洗涤柱子，特别注意柱子要洗净。

3.如果上述情况后基线稳定，应该稳定。那么梯度淋洗流动相组成比例在一定时间内变化基线也应稳定。若不稳定从混合器和检测池检查，很可能是检测池出了问题，混合器混不均匀。

4用得是安洁伦公司的1100HPLC，还是shimazu的。

总之要耐心检查。

什么检测器，自己按梯度条件配一系列的流动相，覆盖你整个梯度的，直接放检测器上检测，就可以知道是不是由流动相组成发成变化引起的

要是B也不加硫酸铵而A中有，并且A与B中的磷酸盐浓度一致，随着梯度的变化，B的比例在上升，吸收值肯定是要降低的，基线下移就很正常了