液相色谱

需要用氨基柱做糖分析，因此需要在反相条件下使用氨基柱，在网上检索了一下，关于氨基柱反相使用的条件，

一种说法是：先用异丙醇冲洗管路；然后接上色谱柱用低流速（0.1ml/min）用30倍柱体积的异丙醇过渡，再换上流动相；

另一种说法是：1. 先用正己烷-乙腈（99：1）以0.5ml/min的流速冲10倍柱体积，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、异丙醇、甲醇、甲醇-水（50：50）冲柱子。
    2.以0.5ml/min的流速用30倍柱体积的pH11.0的氢氧化钠（LUNA）水溶液冲柱子（注意pH值切不可超过11.0），立即用水（0.5ml/min的流速，30倍柱体积）冲洗，再换成流动相。

请教一下，应该用哪一种方法。

“需要用氨基柱做糖分析，因此需要在反相条件下使用氨基柱，”，这个好像没有因果关系吧，本来就是正相柱，用正相系统做就可以。而且正相柱如果用反相溶剂冲，还能有分离效果吗？！

正相系统换成反相系统很简单，依次用异丙醇、甲醇过度就可以了。不要用氯仿，含氯的有机物容易伤害不锈钢管路！

第一种就可以了！第二种是柱子的清洗活化方法！

楼上正解，另外，可以咨询下柱子的生产厂家，厂家的意见应该是最准确的，网上好多东西都不太准确，需要甄别才能使用，我一般都是两者结合来使用，用网上搜索到的东西和厂家的工程师探讨，最后一厂家工程师的意见为准，毕竟只有他们熟悉自己的产品。

准确一点，第二种说法中的第一个是新柱子刚开始使用时候的活化方法，第二个是柱子柱效下降后的清洗再生方法，当然，是对于氨基柱来说的。

前一段时间，因为手头只有甲醇和乙腈，没有别的有机相，经咨询柱子生产厂家，用的纯乙腈来活化的柱子，0.2的流速，4个小时，大概是柱体机的11倍。

感谢大家的帮助。第一次用氨基柱很多都不清楚。我的流动相是乙腈-水（70:30），请问1.我用异丙醇过渡完后，是不是还需要用乙腈过渡一下，再换流动相。2.异丙醇是否一定要用那么低的流速冲30倍柱体积。3.用于氨基柱的流动相中水分的最大比例不能超过多少。谢谢！

试着回答探讨下：

1.是否用乙腈过渡，在于看异丙醇是否和乙腈互溶，若互溶，应该不用过渡了，直接换流动相就可以，因为你的流动相本身就是70%的乙腈水。
2. 第二个我也有疑问，按照柱体积约4.2ml（可根据柱子参数计算）来计算，30倍就是126ml，0.1的流速需要冲柱子21小时，太可怕了，我一般没有冲这么长时间，我使用的氨基柱的柱保护液是纯乙腈，流动相是75%的乙腈水，因此，使用时直接用流动相，不过，总觉得柱子用的时间很短，一个季度就不行了，平均一周也就使用一次，是否和我使用方法有关？
3.这个真不知道。

1、不需要乙腈过渡，两相可以很好的互溶的
2、流速可以提高的，起码我没用出问题，但是要注意控制压力。
3、不同的柱子不一样有的可以短时间耐受纯水