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标题:同志们看过来看过来啦~·snp、测序问题专贴

小困[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问大虾，一个笨问题，Pfu P出来的4KB产物，如何克隆测序啊。产物序列未知，如何选载体啊？ 谢谢
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菠萝菠萝蜜[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位高手帮帮忙，请教一个问题：我想筛查一个基因的SNP位点 此基因片段比较大 宜采用什么方法啊？谢啦！
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小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位高手，老板临时布置的任务，而我对此领域还很陌生，小虾米一个，实验有些问题需要向大家请教：

1.前期对癌组织中XXX基因进行测序分析，发现几个有功能意义的突变（多态），其中1例某位点Y在血液和肿瘤组织中基因型不一致，请教此结果如

何理解、分析？是否有意义？

2.实验新发现某位点5'端启动子突变（只有1个样本有突变），对此结果如何理解、分析？

3.上述结果是否需进一步在正常人群中做验证？

4.是否有价值在此基础上进一步开展工作？

还望大家不吝赐教、指导，先谢谢各位高人！  
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丸子妹[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一个问题，我克隆得到一段800多bp片段，连接转化，摇菌，菌液PCR鉴定与目的片段相符，将菌液取出一般送去测序，另一半菌液-80度保存，第一次送菌液的时候测序得到730bp，因为我的片段是800bp，还差70个bp，将另一半菌液送出去测序，结果却得到380bp片段，这么相同菌液两次测到的结果相差这么大？而且怎么每次都跟预期片段相差这么大？
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丸子妹[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一个问题，我克隆得到一段800多bp片段，连接转化，摇菌，菌液PCR鉴定与目的片段相符，将菌液取出一般送去测序，另一半菌液-80度保存，第一次送菌液的时候测序得到730bp，因为我的片段是800bp，还差70个bp，将另一半菌液送出去测序，结果却得到380bp片段，这么相同菌液两次测到的结果相差这么大？而且怎么每次都跟预期片段相差这么大？
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阿福[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位老师，最近刚接触遗传学，第一个问题是如何找到易感基因，脑子里条理不是很清晰，我把我自己的条理总结了一下，哪位老师，有时间帮我看一看，帮我梳理一下，然后我再逐个技术或者方面开始具体看，要不然脑子一团浆糊，谢谢老师了！！！！

易感基因：（1）已知候选区域：①克隆
②提取DNA———微卫星DNA markers———PCR———测序———Linkage———定位———功能性研究
③提取DNA———SNP———RFLP, OLA, SSCP/ASH, ASPE, SBCE等

（2）未知候选区域：基因芯片大致定位———Linkage———
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小荷尖尖[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #36 阿福 的帖子

这个关键的问题不在实验技术而是方法学
疾病遗传常见的2个模型一个是基于家系
的连锁分析，另外一个是基于散发样本的
关联分析，他们都可以是从某个区域开始或者
全基因组，关键的区别在于样本和分析软件
实验技术是根据不同的方案来设计的~~~~~~~~~~~
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阿福[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位老师，请教一个问题，用T7和Sp6对同一质粒测序经常是一个引物的测序结果很好，另外一个就很差甚至就没信号。最近老遇到这个问题。请大家帮我分析一下，谢了先。
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菠萝菠萝蜜[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问重复序列（基因组）做PCR电泳时严重拖尾，怎么解决
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大虾米[使用道具]
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发表于 2011-8-9 16:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
求助引物设计软件及使用方法，网上引物设计方法。谢谢！
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