小中大关于DNA污染,我在国外的实验室,这里罗嗦两句
先简单介绍下老外的做法
用TRIZOl提RNA,然后用QIAGEN的minieasy 盒子纯化,加上QIAGEN的DNase盒子消化。测OD值,经过TRIZOl提取后比值1.9,经过上述折腾后比值一般不超过1.7。经过这样的提法,大概国内没几个实验室消费的起。
qiagen的说明书上写,一般按照他们的程序提可以去掉大多数DNA。我开始按老外的做,后来实在受不了,有一段时间我每天60个样本的RNA,怎么可能这样做?
于是我按照Qiagen说明书做,没有做DNase消化,但我做real time的时候通常加一个样品,这个样品里面是不加逆转录酶的。经过比较,扩增后基因组dna的影响小于0.5%。
因此我觉得用试剂盒提,然后注意操作是可以不用DNase消化的
另外,建议一下,如果你实在不放心,可以用qiagen的plus的盒子,这个盒子里面多一个柱子,可以高盐去除dna,仅仅多一步15秒的离心而已。
......
==========================================================================================================
我是用invetrogen的Trisol,没用试剂盒。但因为提的组织很微量,怕DNA酶消化过了反倒不好。听说用注射器针头反复吹吸也可以将DNA弄断,但从没试过。