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标题:【分享帖】基因启动子区 甲基化引物设计心得

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Bisulfite sequecing PCR(BSP),它的引物一般不含CpG岛,这样以保证能同等扩增甲基化和非甲基化的模板,然后转克隆测序,一般来说,至少是10个克隆;如果你只有1%的模板发生了甲基化,那么你最少得挑100个克隆才统计到!而MSP的灵敏度可以达到0.1%(参考:Methylation-specific PCR: A novel PCR assay for methylation status of CpG islands)

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BSP的引物一般不含CpG二核苷酸,我们期望能它能同等扩增甲基化和非甲基化的模板,但理论上是不可能的,实际上也已经证明了这种不可能。因为甲基化和非甲基化的模板在处理后GC含量有显著差异。
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而MSP的灵敏度可以达到0.1%(参考:Methylation-specific PCR: A novel PCR assay for methylation status of CpG islands)

===============================================================================================================

MSP的灵敏度可以达到0.1%和MSP的灵敏度是0.1%是完全不同的。
MSP的灵敏度可以达到0.1%,所以99%的甲基化和1%的甲基化,MSP的结果没有区别。而99%的甲基化和1%的甲基化,其生物学意义的重大差别是不言而喻的。
MSP的灵敏度可以达到0.1%,所以98%的转化率,给假阳性、假阴性结果提供了足够的空间。
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最近有点忙!
1、0.1%而不是1%;
2、1个CpG是CpG Island,多个是CpG Islands(CGIs);
3、关于CpG岛的定义(我们母语一个和多个CpG是没有复数区别的,确实经常产生这样的口误或者歧异!):参考文献:An evaluation of new criteria for CpG islands in
the human genome as gene markers(注意这里是复数)
BIOINFORMATICS Vol. 20 no. 7 2004, pages 1170–1177
DOI: 10.1093/bioinformatics/bth059
忙完这些天再来讨论,期待中!
平安夜平安幸福!NEW YEAR! My friends!
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啊,那我检测基因的甲基化依据现有的实验方法MSP法是否就没有什么意义
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QUOTE:
原帖由 vvmmoy 于 2015-7-2 11:15 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

啊,那我检测基因的甲基化依据现有的实验方法MSP法是否就没有什么意义

不能这样说,医学实验的结果一般都是比较的、相对的.只要保持实验组和对照组条件的一致性,结果的可比较性,两组结果有差异,仍然有意义的,反映问题的。
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你好,我刚开始准备作这方面实验,有很多东西不懂,看了你的帖子很受启发。有个问题想请教:我想研究一个未知基因的甲基化情况,我没有p出来它的启动子区,只是p出第一外显子,可是测序只有185bp,有人说太短,不能估计有没有cpg岛,我不是很懂,所以想请教一下,是这样吗?我是不是不能进行下去了?请帮帮忙,非常感谢!
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所谓"未知基因"是从何种意义上来说呢?既然未知,何以知道p出的是第一外显子。基因的启动子区cpg岛,有可能包括第一外显子的部分或全部。你提供情况太少,不好分析。
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真不好意思,说的不清楚。是这样的,我做的homeobox的其中一个基因,这个基因在人和小鼠中有,牛中有第一外显子的,我要做的是羊的,羊中没有,我又不会设计引物,所以参考文献用牛的第一外显子序列设计的引物去p的,p出来去测序。接下来我想用得到启动子序列,可是就不知如何做了,有同学说5‘启动子区不能用设计引物p,我对分子方面真的是个新手,所以请帮帮忙,谢谢了!
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QUOTE:
原帖由 ending 于 2015-7-2 15:00 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
真不好意思,说的不清楚。是这样的,我做的homeobox的其中一个基因,这个基因在人和小鼠中有,牛中有第一外显子的,我要做的是羊的,羊中没有,我又不会设计引物,所以参考文献用牛的第一外显子序列设计的引物去p的,p出来去测序。接下 ...

blast联配分析人和小鼠的启动子序列,找出保守区设计引物,P羊的(GC含量可能比较高,注意调整反应体系和循环参数),测序,结果再与人/小鼠blast联配,如果同源性高,基本可以确定就是羊的该基因的启动子序列。每次可能只能搞定启动子一部分。要搞出整个启动子,需要多设计几对引物。最后就可以拼出整个启动子了。
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老师您好;
我是新手,我做的是MSP,我的引物是引物公司设计的,现在实验已经做结束了,结果也挺好,但我不知道CPG岛怎么找,它的甲基化基因位点怎么找,我是中医类的研究生,对这个现在好像是在读天书,望请赐教这些弱智的问题!
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