PCR仪 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】A260/230的值偏低如何解决

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:【求助】A260/230的值偏低如何解决

txwuyan[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 114485
精华 0
积分 328
帖子 375
信誉分 100
可用分 2614
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-9-25
状态 离线
1
 

【求助】A260/230的值偏低如何解决


我用Qiagen的RNeasy mini kit提取RNA, A260/280的值可以,但A260/230的值偏低。Qiagen告诉我可能盐污染,我clean up结果还是不好,请问如何解决?
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
2
 

你好,请问你的问题解决了吗?我提取得RNA230一直都出不来,显示的是6个+,很郁闷,并且我p不出内参来。
顶部
xue258[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
3
 
我用手工提取dna,但是也是260/230的值不太好,同一批提取的样品,又的值很小,有的1.7多,不知道改怎么去掉这些小分子的影响
顶部
zhezhe[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 72891
精华 1
积分 610
帖子 856
信誉分 102
可用分 5088
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-15
状态 离线
4
 

260/230的值偏低是什么原因,如何解决?谢谢!
顶部
04906[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73544
精华 0
积分 599
帖子 858
信誉分 100
可用分 5155
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
5
 

260nm、230nm、下的吸光度分别代表了核酸、盐浓度的吸光度值,OD260/OD230<2说明去盐不充分,可以再次沉淀和70%乙醇洗涤。
还有就是少量异硫氰酸胍残留会使 OD230 变大,但 OD260,OD280 几乎不变,OD260/230 大大低于 2。
顶部
eor[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117906
精华 0
积分 392
帖子 484
信誉分 100
可用分 3226
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
6
 

同意楼上所说。
260/230比值偏小,是有盐污染,我们实验室解决的办法是:
在乙醇洗脱步骤时:
1、75%乙醇,4℃,7500g/min,离心5min;
2、倒掉乙醇,再加入75%乙醇,条件同上,做第二次洗脱(注意,这次EP管在离心机
里的摆放方向与第一次相反,以便能更全面的洗脱);
3、再次掉转EP管在离心机中的方向(不再加入乙醇),7500g/min,4℃,离心3min
后,用200μl的枪小心吸去乙醇(注意不要吸到管底的RNA),然后开盖晾干乙醇即
可。
这样做后,比只用乙醇洗一次的效果要好很多,我们所提RNA用nanodrop测得260/230
值均在2.0左右。
以上是我们的一点经验,希望对楼主有用。
顶部
DCS[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 117837
精华 0
积分 326
帖子 371
信誉分 100
可用分 2631
专家分 0
阅读权限 255
注册 2013-12-7
状态 离线
7
 

我再多洗一次不是更干净?
顶部
bs4665[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75127
精华 0
积分 505
帖子 650
信誉分 100
可用分 4136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
8
 

260/230从来没超过2.0的人飘过,基本1-1.5左右。
可以试着多用75%酒精洗一次,2005的方法很好,学习了。
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
9
 

我提取的也是这样,不过我用75%酒精洗两次,结果还是很低,不知道还有没有解决办法〉是不是我用的血细胞抗凝剂的问题?
顶部
milkdog[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79280
精华 0
积分 500
帖子 719
信誉分 100
可用分 4366
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-9
状态 离线
10
 

我也遇到类似情况,用的是QIAamp® RNA Blood Mini kit提取人外周血里的RNA,现在OD260/280都很好,在1.8-2.0,但是OD260/230极低,而且提取的浓度也很不好,不知道什么原因。。。。。。。。
顶部