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标题:【求助】荧光定量PCR的CT值太高

bring[使用道具]
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发表于 2015-7-3 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有可能是RNA降解的原因，建议将RNA跑个电泳看看。
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ending[使用道具]
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发表于 2015-7-3 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

奥，呵呵，我以为你actin 4个也对应着有4个目的扩增片段哪，呵呵
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qqq111[使用道具]
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发表于 2015-7-3 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问各位大侠做实时荧光定量PCR，你们的模板cDNA 10微升体系的，一般稀释多少呢？还是要自己摸索啊
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woshi[使用道具]
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发表于 2015-7-3 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做实时荧光定量PCR最好不能低于20ul体系，不然荧光信号不稳定。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2015-7-3 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 woshi 于 2015-7-3 11:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

做实时荧光定量PCR最好不能低于20ul体系，不然荧光信号不稳定。

引物特异性差，重新设计引物，多设计几条
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xyw5[使用道具]
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发表于 2015-7-3 11:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

从图上看产物的量很多。
你可以在PCR扩增过程中取样跑电泳，即不同循环下取样或取一管。
从电泳中就可以看出来是大致是哪个循环下就出峰了。（相当于用普通PCR仪做定量）
如果比较早就出峰，可能是你的Sybr有问题或管有问题（管盖不够透明之类的）或是仪器光路系统有问题等
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