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标题:【求助】超滤问题

TAT[使用道具]
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【求助】超滤问题


超滤技术很方便,但也有缺陷:它能节流大分子物质,但对细菌节流效果不佳,可以说还不如0.22um的除菌滤芯。请问原因?另外,超滤有浓缩功能,大分子被浓缩无法通过膜芯,机械摩擦会产热,如何保证膜孔径均一?被浓缩蛋白质不变性?
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nikonun[使用道具]
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请问可以用超滤来去除病毒,节流目的蛋白,细菌病毒流掉了,除菌效果为什么还不如0.2μm的除菌过滤呢?
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wawa[使用道具]
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整个超滤过程采用密闭管道,完全可以做到无菌的。至于你说的大分子无法通过模芯,建议选用合适空间的膜包或中空纤维。
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eric930[使用道具]
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超滤孔径不是大小均一的,切向流技术已经成熟应用到大规模产业化中,所以你需要你的问题在哪?
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greenbee[使用道具]
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超滤技术很方便,但也有缺陷:它能节流大分子物质,但对细菌节流效果不佳,可以说还不如0.22um的除菌滤芯。请问原因?另外,超滤有浓缩功能,大分子被浓缩无法通过膜芯,机械摩擦会产热,如何保证膜孔径均一?被浓缩蛋白质不变性?
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请问可以用超滤来去除病毒,节流目的蛋白,细菌病毒流掉了,除菌效果为什么还不如0.2μm的除菌过滤呢?
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以上两个问题我理解没错的话,都涉及到是否能用超滤除菌,回复如下:
1. 除菌过滤膜的定义与孔径无关,仅仅与是否进行过细菌挑战有关。除菌过滤不仅仅是实际检测的无菌,对于制药生产来说更重要的是法规上的意义。
2. 超滤本身只能开放操作,难以保证过程无菌。
因此,采用超滤无法进行除菌过滤。至于超滤可以用来除病毒,这是可以的,但除病毒与除菌是不一样的。虽然病毒比细菌小,但除病毒膜从法规意义上是不能除菌的(没有进行细菌挑战)。
另一个问题是如何保证超滤时蛋白不变性。首先,剪切力或少量的温度上升并不一定会导致蛋白变性,对绝大部分蛋白采用超滤的工艺是不会导致蛋白变性的。其次,我们可以通过改变超滤膜型号、泵种类、切向流速等方式控制剪切力,对于需要低温的蛋白可以通过加装保温夹套的方式维持低温。
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nikun230[使用道具]
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哎!我也愁死了!最近在做大分子蛋白的超滤,分子量差不多60KD,用10KD的膜包居然全透了!用5KD的没有透过,但是回流的蛋白浓度据让比原来的低了!我知道应该是被截在膜包里面了!但是为什么呢?求高人解释一下……
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QUOTE:
原帖由 nikun230 于 2015-7-8 18:29 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

哎!我也愁死了!最近在做大分子蛋白的超滤,分子量差不多60KD,用10KD的膜包居然全透了!用5KD的没有透过,但是回流的蛋白浓度据让比原来的低了!我知道应该是被截在膜包里面了!但是为什么呢?求高人解释一下…… ...

你有10KD的膜无法截留你的目标蛋白,其原因可能有:(1)你的目标蛋白是线性的,线性的蛋白比较容易穿透。一般超滤膜的截留分子量选择为目标蛋白分子量的1/3到1/6,但是各个蛋白的构型和各个厂家生产的超滤膜质量的差异,导致实际应用中的截留率会有一些变化,这个需要自己在膜包选型的时候,做一些实验来验证了。(2)膜包发生破损。你可以测定你膜包的完整性,或者测一下水通量检查一下。
你采用5KD膜包,蛋白有损失,其原因可能有;(1)你的工艺参数不够合适,导致超滤目标蛋白发生降解,或者变性沉淀。你需要调整缓冲液或者降低剪切力,以增强目标蛋白的稳定性。(2)你的膜包材质不合适。膜包有很多不同材质,有些材质的膜包对蛋白有非特性吸附,这个会导致目标蛋白的损失,通常这个损失量不会很大,如果你的目标蛋白损失很多的话,那么很可能是第一个原因。
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yayya[使用道具]
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QUOTE:
原帖由 TAT 于 2015-7-8 18:26 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

超滤技术很方便,但也有缺陷:它能节流大分子物质,但对细菌节流效果不佳,可以说还不如0.22um的除菌滤芯。请问原因?另外,超滤有浓缩功能,大分子被浓缩无法通过膜芯,机械摩擦会产热,如何保证膜孔径均一?被浓缩蛋白质不变性? ...

超滤膜除菌效果不如0.22um的除菌滤芯是理所当然的。超滤膜的孔径是不均一的,一般以截留分子量来表征其孔径,而且其定义截留分子量的时候也只是要求达到90%的截留。所以超滤膜对目标分子始终是有渗漏的,不能达到100%截留。这孔径不均一是与超滤膜的结构有关的,超滤膜是一个有一定厚度的不对称结构膜,膜两侧的孔径大小是不一样的。
除菌滤芯的膜是单层膜,膜孔径十分均一,而且其法规上定义的除菌滤芯都是要达到99.99%的截留才能算是合格的。都需要通过细菌挑战性实验的验证才算合格。所以除菌滤芯的的除菌效果肯定要高于超滤膜。
所以除菌效果不能只看孔径大小,还得看膜的结构和孔径的定义。
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koook5695[使用道具]
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前处理处理的不好吧
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sunbent[使用道具]
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前处理处理的不好吧
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