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标题:【讨论帖】正在养或已经养过HUVEC的请进

dog002[使用道具]
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我刚买了HUVEC (GDC023  人脐静脉内皮细胞系(ECV-304) 人 国外)在武汉,400元,我不理解原代培养如此费时,大家为何不买HUVEC,是不是我买的HUVEC不是内皮细胞,希望得到答复,谢谢.....
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dog002[使用道具]
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武汉培养物保藏中心
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dog002[使用道具]
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我刚购买了人脐静脉内皮细胞,来时便发现有圆球状贴璧不好的细胞,培养两天并传了一代后,发现贴璧不好的细胞更多了,他们呈圆球状,并不悬浮,也不象生长好的细胞那样呈鹅卵石样铺于瓶璧.
今天第四天,细胞开始悬浮了,并越来越多,郁闷
我刚换了培液......死马当活马医吧.....
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ECV304来源于人脐静脉内皮细胞,但性状却偏向于膀胱上皮细胞
而HUVEC一般指原代细胞。
所以选择ECV304细胞做实验,特别是有关内皮细胞特性的实验要慎重,因为所得的结果可能与原代细胞有偏差。
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tudou85[使用道具]
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ATCC提供的人脐带内皮细胞图片


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tudou85[使用道具]
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关于ECV304,请看欧洲细胞培养物中心的说明。似乎说明错误的源头是日本人。In vitro有专文报道ECV304不是脐带静脉内皮细胞,有兴趣直接上Pubmed搜索即可。
ECACC No.
92091712
Cell Line Name
ECV304
Keywords
Human urinary bladder carcinoma
Cell Line Description
Using new PCR based single locus fingerprint techniques, it was discovered that this cell line is identical to T-24. Because T-24 was established in 1970 compared to 1984 for ECV304 it is assumed that ECV304 is the false cell line. Originally, ECV304 was described by the originator as spontaneously transformed cell line derived from an umbilical cord from a new born Japanese female. Tumorigenic in Nude mice.
Species
Human
Tissue
Bladder
Morphology
Epithelial-like
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养了一个多月的原代,发现要做好真的很难,影响因素太多了,我想用内皮细胞株EAhy926来代替HUVEC做内皮功能实验,不知道是否可以?
请高手指点.谢谢
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gmt[使用道具]
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有没有人知道内皮细胞同步化的方法,多谢!
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ending[使用道具]
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各位战友:难道不加任何生长因子,HUVEC就养不出来吗?看了很多文献都没加呀?而且一定要进口的血清吗?
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dog002[使用道具]
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我的脐静脉内皮细胞原代生长还可以,可是一传代以后就挤成一团不再生长分裂,10来天也不能传代,而且逐渐死亡。我用的培养液是M199+HEPARIN+ECGF(10ng/ml)+15%FBS+5%AB,传代用胰酶0.25%+0.02%EDTA,细胞消化后,加少量含血清培养基终止消化并将细胞吹打下来,以1000转/分离心5分钟,弃上清,加培养液,重悬细胞以2*105/ml接种培养瓶,可细胞就是不长。高手能否指点一下。多谢
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